Question

【題目】消癌平是烏骨藤提取物水溶液，臨床上治療胃癌已獲良好療效。欲進(jìn)一步研究其對(duì)癌癥的作用效果，某研究人員進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)材料：人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞株，96孔板，細(xì)胞培養(yǎng)液，50mg/mL的消癌平、生理鹽水，CO2培養(yǎng)箱，MTT作用液（一種檢測細(xì)胞存活和生長的試劑）等

實(shí)驗(yàn)思路：

取對(duì)數(shù)生長的細(xì)胞，計(jì)數(shù)后配制成細(xì)胞懸液，隨后加入96孔板，置于37℃CO2培養(yǎng)箱。將細(xì)胞懸液均分成6組，用生理鹽水和藥物（不同濃度的消癌平）作用7d，加MTT作用液，測OD值，計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的抑制率。抑制率=（對(duì)照組OD540-加藥組OD540）/對(duì)照組OD540×100%。回答下列問題：

（1）癌細(xì)胞增殖情況的判定可通過細(xì)胞計(jì)數(shù)，常采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法，若本實(shí)驗(yàn)用的對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞數(shù)量要達(dá)到5×106個(gè)/mL，則采用25（中）×16（小）規(guī)格，每小格高度0．10mm，面積1/100mm2的計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)總數(shù)需達(dá)____________個(gè)癌細(xì)胞；此外癌細(xì)胞標(biāo)志分泌物的檢查，也是臨床常用方法。本實(shí)驗(yàn)中可取經(jīng)培養(yǎng)后的癌細(xì)胞懸液，進(jìn)行___________來檢測。

（2）請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表___________。

（3）分析與討論：

①用流式細(xì)胞儀檢測消癌平針劑對(duì)人胃癌（SGC-7901）細(xì)胞的作用機(jī)理如下圖，則抑制作用在細(xì)胞周期___________時(shí)期，關(guān)于抑制作用方式，請(qǐng)你提出合理的假設(shè)____________________。

②若采用體內(nèi)試驗(yàn)的方法研究消癌平對(duì)人胃癌細(xì)胞治療作用，在將人胃癌（SGC-7901）細(xì)胞制備成的細(xì)胞凝塊接種到小鼠體內(nèi)時(shí)，應(yīng)對(duì)小鼠作____________處理。

③為了更全面地了解消癌平對(duì)癌細(xì)胞的治療效果，還可以從____________方面開展研究。（請(qǐng)答出2點(diǎn)）

Answer 1

【答案】400 離心后取細(xì)胞上清液 不同濃度消癌平對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞生長抑制作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表

組別	OD540	抑制率%
空白對(duì)照（生理鹽水）
10mg/mL的消癌平
20mg/mL的消癌平
30mg/mL的消癌平
40mg/mL的消癌平
50mg/mL的消癌平

G1 消癌平抑制了DNA的復(fù)制，消癌平抑制了RNA的合成等 免疫抑制 如不同癌細(xì)胞種類；不同接種天數(shù)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察等

【解析】

本實(shí)驗(yàn)的目的是研究消癌平對(duì)癌癥的作用效果，故實(shí)驗(yàn)的自變量是不同濃度的消癌平，因變量是對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用。

（1）該計(jì)數(shù)板每小格的體積是0.1×0.01=0.001 mm3，若本實(shí)驗(yàn)用的對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞數(shù)量要達(dá)到5×106個(gè)/mL，則每小格即0.001 mm3的細(xì)胞數(shù)目為5×106÷106=5個(gè)，該計(jì)數(shù)板的規(guī)格為25（中）×16（�。�，故計(jì)數(shù)時(shí)需要計(jì)數(shù)5個(gè)中方格即5×16=80個(gè)小方格的細(xì)胞數(shù)目，即80×5=400個(gè)，故計(jì)數(shù)總數(shù)需達(dá)400個(gè)癌細(xì)胞；癌細(xì)胞的分泌物經(jīng)離心后處于上清液中，故本實(shí)驗(yàn)中可取經(jīng)培養(yǎng)后的癌細(xì)胞懸液，進(jìn)行離心后取上清液來檢測。

（2）本實(shí)驗(yàn)的自變量是不同濃度的消癌平，因變量是人胃癌SGC-7901細(xì)胞生長情況，故不同濃度消癌平對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞生長抑制作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表如下：

組別	OD540	抑制率%
空白對(duì)照（生理鹽水）
10mg/mL的消癌平
20mg/mL的消癌平
30mg/mL的消癌平
40mg/mL的消癌平
50mg/mL的消癌平

（3）①由圖可知，消癌平處理后，處于復(fù)制過程中及復(fù)制完成的細(xì)胞比例減少，說明抑制作用很可能發(fā)生在細(xì)胞周期的G1期，可能是消癌平抑制了DNA的復(fù)制。

②由于人的胃癌（SGC-7901）細(xì)胞對(duì)于小鼠相當(dāng)于是抗原，會(huì)誘發(fā)小鼠的免疫反應(yīng)，故需要對(duì)小鼠進(jìn)行免疫抑制處理，以降低免疫排斥反應(yīng)。

③本實(shí)驗(yàn)探究了不同濃度的消癌平對(duì)癌細(xì)胞的治療效果，還可以研究消癌平對(duì)不同癌細(xì)胞的作用，或不同接種天數(shù)的治療效果等。