Question

【題目】 為了增加菊花花色類型，研究者獲取其他植物的花色基因C，將其與質粒重組為基因表達載體，再借助農桿菌導入菊花中。回答下列問題。

（1）獲取花色素基因C的方法有_____（答出一條即可）。將花色素基因C與質粒構建為基因表達載體時需要用到的工具酶有_____。

（2）基因表達載體中必須含有標記基因。標記基因的作用是_____。

（3）除農桿菌轉化法外，還可以采用_____等方法將基因表達載體導入菊花中。

（4）目的基因導入受體細胞后，可以采用DNA分子雜交技術檢測C基因是否整合到菊花的DNA上。請簡要描述檢測的操作過程：_____。

（5）檢測基因C是否翻譯成蛋白質，是從轉基因菊花中提取出蛋白質，進行_____雜交，若有雜交帶出現，表明基因C已形成蛋白質產品。

Answer 1

【答案】從基因文庫中獲取目的基因或利用PCR技術擴增目的基因 限制性核酸內切酶、DNA連接酶 鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而篩選出含有目的基因的細胞 基因槍法或者花粉管通道法 提取出轉基因菊花的基因組，將花色素基因C用同位素等標記作為探針，使探針與基因組雜交 抗原﹣抗體

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質——抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）獲取目的基因的方法有：從基因文庫中獲取目的基因、利用PCR技術擴增目的基因；構建基因表達載體時，首先需要用限制酶切割目的基因和運載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA。

（2）標記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而篩選出含有目的基因的細胞。

（3）將目的基因導入植物細胞可采用農桿菌轉化法、基因槍法或者花粉管通道法。

（4）檢測目的基因是否導入受體細胞，可采用DNA分子雜交技術，過程為：提取出轉基因生物的基因組，將目的基因用同位素等標記作為探針，使探針與基因組雜交。

（5）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，可采用抗原-抗體雜交法，即從轉基因菊花中提取出蛋白質，進行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現，表明目的基因已形成蛋白質產品。