Question

17．痤瘡丙酸桿菌引發(fā)免疫反應(yīng)造成了青春痘，某公司靶向定位細(xì)菌內(nèi)CAMP基因，該基因編碼CAMP蛋白對(duì)宿主細(xì)胞有殺傷作用．若CAMP抗體與細(xì)菌產(chǎn)生的CAMP蛋白相結(jié)合，即可抑制該細(xì)菌對(duì)宿主細(xì)胞的影響．其研究流程如下：
CAMP基因$\stackrel{導(dǎo)入}{→}$蘿卜$\stackrel{少量的蘿卜葉撒入小鼻腔}{→}$提取小鼠體內(nèi)CAMP蛋白抗體$\stackrel{→}{混合}$痤瘡丙酸桿菌菌落→注入小鼠
（1）不能將CAMP基因直接導(dǎo)入蘿卜細(xì)胞的原因是目的基因不能在小鼠細(xì)胞穩(wěn)定存在和表達(dá)，因此需構(gòu)建基因表達(dá)載體，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入蘿卜細(xì)胞的常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其中用作運(yùn)載體的是Ti質(zhì)粒．
（2）檢測(cè)在蘿卜細(xì)胞中CAMP基因是否編碼產(chǎn)生CAMP基因是否編碼產(chǎn)生CAMP蛋白，應(yīng)用抗原-抗體雜交方法，若出現(xiàn)雜交帶，則說(shuō)明該基因能正常表達(dá)．
（3）現(xiàn)該公司預(yù)生產(chǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高并可大量制備的CAMP蛋白抗體，應(yīng)采用單克隆抗體技術(shù)，最終可在細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取CAMP蛋白抗體．

Answer 1

分析 基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的獲取
第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建
第三步：將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞
將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等．
第四步：目的基因的檢測(cè)和表達(dá)
1、首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)．
2、其次還要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交．
3、最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的 抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交．
4、有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定．如轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)植物是否出現(xiàn)抗蟲(chóng)性狀．

解答 解：（1）由于目的基因不能在小鼠細(xì)胞穩(wěn)定存在和表達(dá)，因此不能將CAMP基因直接導(dǎo)入蘿卜細(xì)胞，因此需構(gòu)建基因表達(dá)載體，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入蘿卜細(xì)胞的常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其中用作運(yùn)載體的是Ti質(zhì)粒．
（2）檢測(cè)在蘿卜細(xì)胞中CAMP基因是否編碼產(chǎn)生CAMP基因是否編碼產(chǎn)生CAMP蛋白，應(yīng)用抗原-抗體雜交方法，若出現(xiàn)雜交帶，則說(shuō)明該基因能正常表達(dá)．
（3）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)有：特異性強(qiáng)、靈敏度高、化學(xué)性質(zhì)單一等．單克隆抗體技術(shù)，最終可在細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取CAMP蛋白抗體．
故答案為：
（1）目的基因不能在小鼠細(xì)胞穩(wěn)定存在和表達(dá)        基因表達(dá)載體       農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法      Ti質(zhì)粒
（2）抗原-抗體雜交                   雜交帶
（3）單克隆抗體             小鼠腹水

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程和單克隆抗體制備的有關(guān)知識(shí)，要求學(xué)生能夠掌握基因工程的操作步驟，識(shí)記目的基因?qū)�入受體細(xì)胞以及目的基因鑒定與鑒定的方法，識(shí)記單克隆抗體制備的過(guò)程和優(yōu)點(diǎn)，再結(jié)合題意準(zhǔn)確作答．