Question

【題目】“地溝油，城市下水道里悄悄流淌的垃圾”。地溝油最大的來源為城市飯店下水道的隔油池。對(duì)地溝油的處理是一個(gè)難題，用脂肪酶處理地溝油具有廣泛的應(yīng)用前景。為獲得高產(chǎn)脂肪酶的菌株，并將之用于產(chǎn)業(yè)化，某研究小組進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題：

(1)欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，應(yīng)配制________碳源的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于________培養(yǎng)基。

(2)經(jīng)過稀釋，在平板上接入0.1 mL稀釋液并涂布，經(jīng)適當(dāng)時(shí)間培養(yǎng)后，在平板上計(jì)數(shù)菌落，據(jù)此可計(jì)算出每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小，原因可能有________、__________________。

(3)經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)得到如下表所示的結(jié)果，為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇________稀釋倍數(shù)的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。有同學(xué)認(rèn)為稀釋操作時(shí)，可以將1 mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數(shù)，這樣可以簡(jiǎn)化步驟，省去梯度稀釋的麻煩。你認(rèn)為這種方法是否合理并說明理由。____________

稀釋倍數(shù)	101	102	103	104	105	106
培養(yǎng) 結(jié)果
計(jì)數(shù)(平均值)	難以計(jì)數(shù)	難以計(jì)數(shù)	難以計(jì)數(shù)	159	17	2

(4)如果脂肪酶的產(chǎn)業(yè)化需要其活性在固定化處理時(shí)不受損失，且在多次重復(fù)使用后仍能維持穩(wěn)定的酶活性，則應(yīng)選擇右表中的________法固定化工藝。使用分泌脂肪酶細(xì)菌與固定化脂肪酶進(jìn)行生產(chǎn)，都需要適宜的________(填入下面選項(xiàng)的序號(hào))。

①溫度　�、谒�　�、蹱I(yíng)養(yǎng)　�、躳H

Answer 1

【答案】以脂肪為唯一(碳源)　 選擇 有的菌落是由2個(gè)以上的細(xì)菌形成的 涂布器上還殘留少量細(xì)菌 104　 不合理(否) ，在做梯度稀釋之前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30～300之間 包埋(法) ①②④

【解析】

本題考查微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、酶的活性實(shí)驗(yàn)和固定化酶技術(shù)的有關(guān)知識(shí)，意在考查考生識(shí)圖能力和能從課外材料中獲取相關(guān)的生物學(xué)信息，并能運(yùn)用這些信息，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問題的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)與觀點(diǎn)，通過比較、分析與綜合等方法對(duì)某些生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論；考查理論聯(lián)系實(shí)際，綜合運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決自然界和社會(huì)生活中的一些生物學(xué)問題的能力。

(1) 欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，要在培養(yǎng)基中加入特定的碳源，應(yīng)配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基。

(2)在平板上接入稀釋液并涂布，培養(yǎng)后，在平板上計(jì)數(shù)菌落，據(jù)此計(jì)算每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。由于可能有的菌落是由2個(gè)以上的細(xì)菌形成的，也可能涂布器上還殘留少量細(xì)菌，故這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小。

(3) 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇104稀釋倍數(shù)，稀釋操作時(shí)，將1 mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數(shù)，因?yàn)樵谧鎏荻认♂屩�前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30～300之間，故這種方法不合理。

（4）如果脂肪酶的產(chǎn)業(yè)化需要其活性在固定化處理時(shí)不受損失，且在多次重復(fù)使用后仍能維持穩(wěn)定的酶活性，則應(yīng)選擇表中的包埋法固定化工藝，因包埋法酶活力損失小，與載體結(jié)合力強(qiáng)，成本適中，符合產(chǎn)業(yè)化的要求。使用分泌脂肪酶細(xì)菌與固定化脂肪酶進(jìn)行生產(chǎn)，需要適宜的溫度、水、pH等，保證細(xì)菌正常生活，酶的最適溫度和酸堿度。