【題目】綠色熒光蛋白(GFP)能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光,這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動(dòng)情況,幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。下圖為我國(guó)首例綠色熒光蛋白(GFP)轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖,據(jù)圖回答:

(1)圖中通過①、②過程形成重組質(zhì)粒,需要限制酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一G↓GATCC—,限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的1個(gè)切點(diǎn),在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)。

①請(qǐng)畫出目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端_________________________________。

②在DNA連接酶的作用下,上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端可以連接起來的原因是_________

(2)過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時(shí),采用最多也最有效的方法是____________________。

(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上,GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因,其作用是_____________________。獲得的轉(zhuǎn)基因豬,可以解決的醫(yī)學(xué)難題是________。

(4)目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等,采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是______________________(用序號(hào)表示)。

①推測(cè)藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列

②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)

③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾(合成)

④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白

(5)若科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白與原來的蛋白相比,第222位氨基酸發(fā)生了替換,則藍(lán)色熒光蛋白基因與原來的蛋白基因相比,至少有___________個(gè)堿基對(duì)發(fā)生變化。

【答案】 因?yàn)橛蓛煞N不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的 顯微注射技術(shù) 鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因 供體器官不足和免疫排斥 ②①③④ 1

【解析】試題分析:分析題圖:圖示為我國(guó)首例綠色熒光蛋白(GFP)轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖,其中①表示獲取目的基因(綠色熒光蛋白基因)的過程;②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程;③表示將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞;此外還采用了核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)。

(1)①限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一↓GATC—,且目的基因兩側(cè)都有限制酶Ⅱ的切點(diǎn),則其被限制酶Ⅱ切割的圖形如下:。

②因?yàn)橛蓛煞N不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的,因此在DNA連接酶的作用下,上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端可以連接起來。

(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞時(shí),采用最多也最有效的方法是顯微注射法

(3)重組質(zhì)粒上的標(biāo)記基因的作用是鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因;獲得的轉(zhuǎn)基因豬,可以解決醫(yī)學(xué)上供體器官不足和免疫排斥的難題。

(4)蛋白質(zhì)工程的操作過程:預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)→基因表達(dá)合成相應(yīng)的蛋白質(zhì).因此采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是②①③④。

(5)根據(jù)題意分析,蛋白質(zhì)工程制造的藍(lán)色熒光蛋白與原來的蛋白相比,第222位氨基酸發(fā)生了替換,則決定該位點(diǎn)氨基酸的密碼子發(fā)生了改變,密碼子是由三個(gè)堿基組成的,最少有一個(gè)堿基改變才會(huì)導(dǎo)致氨基酸的種類發(fā)生改變,因此藍(lán)色熒光蛋白基因與原來的蛋白基因相比,至少有1個(gè)堿基對(duì)發(fā)生變化。

練習(xí)冊(cè)系列答案
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(2)成功構(gòu)建的基因表達(dá)載體又叫____________

(3)題中所用的將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法是____________。

(4)培育的轉(zhuǎn)基因抗蟲油菜是否成功,最簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法是____________。

(5)已知轉(zhuǎn)基因油菜中,殺蟲蛋白只結(jié)合某些昆蟲腸上皮細(xì)胞表面的特異性受體,使其細(xì)胞膜穿孔,腸細(xì)胞裂解,昆蟲死亡,而該殺蟲蛋白對(duì)人類的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較小。其原因主要是________________________。

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