Question

【題目】科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對(duì)寒冷的環(huán)境中生長(zhǎng)．質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制性核酸內(nèi)切酶切割位點(diǎn)，如圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①∽④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞．請(qǐng)據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用一種或多種限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割，為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該選用限制性核酸內(nèi)切酶 ______ 分別對(duì) ______ 、 ______ 進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為 ______ 、 ______ 種。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會(huì)抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使I重組DNA中含有 ______ 作為標(biāo)記基因。

（3）研究人員通常采用 ______ 法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。

Answer 1

【答案】 PstI、SmaI 含魚抗凍蛋白基因的DNA 質(zhì)粒 4 2 抗氨芐青霉素基因 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

【解析】試題分析：本題考查基因工程的操作程序，考查對(duì)基因工程工具的特點(diǎn)、各操作步驟原理的理解。

（1）考慮既不破壞目的基因又能切除目的基因，在此實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該選用限制性核酸內(nèi)切酶PstI和SmaI分別對(duì)含魚抗凍蛋白基因的DNA 和質(zhì)粒進(jìn)行切割，在含魚抗凍蛋白基因的DNA上共有三個(gè)酶切位點(diǎn)，切割后產(chǎn)生的DNA片段有4種，環(huán)形質(zhì)粒上有2個(gè)酶切位點(diǎn)，酶切后有2種DNA片段。

（2）質(zhì)粒中的抗氨芐青霉素基因作為標(biāo)記基因，可用于篩選已導(dǎo)入魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞。

（3）將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。