Question

【題目】苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害．小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)圖1操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株．請回答下列問題：

（1）酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有___．

（2）將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸__．以達(dá)到富集酚降解菌的目的．若圖1平板中菌落過于密集，應(yīng)進(jìn)一步___________，以便于菌落計(jì)數(shù)與分離．制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加 ___________ ．

（3）小明同學(xué)利用平板劃線法純化酚降解菌,他在培養(yǎng)基上共劃了5個區(qū)域,則需要__________次(填數(shù)字)灼燒接種環(huán).

（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量．先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中1～5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為__________________．

管號	1	2	3	4	5	6
苯酚濃度（mg/L）						1

如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_______（填序號：①5②10③20）倍后，再進(jìn)行比色．

Answer 1

【答案】 蛋白胨、苯酚 增加 稀釋涂布 凝固劑（瓊脂） 6 0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③

【解析】 稀釋涂布平板法和平板劃線法接種目的菌進(jìn)行分離、純化，前者主要應(yīng)用于對目的菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，通過形成菌落來估算，后者僅僅是純化菌種，但也需要挑選單菌落，所以二者都需要在固體培養(yǎng)基上完成培養(yǎng)。為了防止操作中、操作后造成雜菌污染，所以應(yīng)注意每個環(huán)節(jié)中盡可能做到無菌操作，如對接種環(huán)的灼燒，在酒精燈的火焰旁進(jìn)行接種環(huán)操作等等。

（1）從培養(yǎng)基內(nèi)的成分來看，只有蛋白胨和苯酚內(nèi)含有碳元素，因此可以作為碳源。

（2）因?yàn)樽罱K要獲得的菌株為可以高效降解酚的菌株，所以苯酚的用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加；稀釋涂布平板法可以分離密集菌落，同時(shí)便于菌落的計(jì)數(shù)；平板培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，在制備時(shí)除應(yīng)加入的水及其他營養(yǎng)物質(zhì)后，還需加入凝固劑（瓊脂）。

（3）用平板劃線法純化目的菌（酚降解菌）,為了防止雜菌污染，每次劃線前都要進(jìn)行灼燒接種環(huán)，且最后依次劃線結(jié)束后，為了防止菌種污染環(huán)境，還要再次灼燒接種環(huán)，所以5次劃線，需要灼燒6次接種環(huán)。

（4）題干中提到要制作系列濃度梯度進(jìn)行顯色反應(yīng)，共配制了六支比色管，所以六支比色管的濃度值依次分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8、1；廢水中含有50mg/L 苯酚溶液，降解后剩余21%，則剩余中含有10.5mg/L 苯酚溶液，經(jīng)過5倍或10倍稀釋后分別為2.1mg/L 和1.05mg/L ，不在比色區(qū)間內(nèi)，而20倍稀釋后濃度為0.5mg/L ，在比色區(qū)間內(nèi)，因此要稀釋20倍后再進(jìn)行比色。