Question

7．酸奶是以牛奶為原料，經(jīng)過巴氏殺菌后再向牛奶中添加有益菌，經(jīng)發(fā)酵制成．家庭自制酸奶的安全隱患是有害菌污染問題，為檢測(cè)自制酸奶是否被雜菌污染，進(jìn)行如圖所示操作．回答下列問題．
（1）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，倒平板待其冷卻后將平板倒置的主要原因是防止冷凝水污染培養(yǎng)基．
（2）取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，涂布前要將涂布器灼燒冷卻后才能涂布．如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)（形狀、大小、顏色、光澤度）不同的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染．
（3）在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間后，3個(gè)平板上菌落數(shù)分別為65個(gè)、63個(gè)、64個(gè)，則可以推測(cè)酸奶中每毫升含菌數(shù)為6.4×10⁸個(gè)．運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值偏小，原因是有的菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)菌體形成的．
（4）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，進(jìn)一步分離純化乳酸菌的方法是挑取乳酸菌菌落在無菌的條件下繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，該操作中常使用的接種工具是接種環(huán)．若培養(yǎng)后獲得的某個(gè)平板，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成第一條線上無菌落的可能操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻、未從第一區(qū)域末端開始劃線．

Answer 1

分析 1、配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項(xiàng)
①倒平板的溫 度一般50℃左右適宜，溫度過高會(huì)燙手，過低培養(yǎng)基又會(huì)凝固；
②平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染．
2、平板劃線操作的注意事項(xiàng)
①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌；
②灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；
③劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連；
④劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破．

解答 解：（1）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染．
（2）稀釋涂布平板法中，為了防止雜菌的污染，涂布前要將涂布器灼燒冷卻后才能涂布．如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)形狀、大小、顏色、光澤度等不同的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染．
（3）分析圖解可知，酸奶稀釋了10⁶倍，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間后，3個(gè)平板上菌落數(shù)分別為65個(gè)、63個(gè)、64個(gè)，則可以推測(cè)酸奶中每毫升含菌數(shù)為=（65+63+64）÷3÷0.1×10⁶=6.4×10⁸個(gè)．由于有的菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)菌體形成的，因此運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值偏�。�
（4）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，進(jìn)一步分離純化乳酸菌的方法是挑取乳酸菌菌落在無菌的條件下繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，該操作中常使用的接種工具是接種環(huán)．若培養(yǎng)后獲得的某個(gè)平板，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成第一條線上無菌落的可能操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻、未從第一區(qū)域末端開始劃線．
故答案為：
（1）防止冷凝水污染培養(yǎng)基
（2）灼燒冷卻后�。ㄐ螤�、大小、顏色、光澤度）不同
（3）6.4×10⁸　有的菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)菌體形成的
（4）挑取乳酸菌菌落在無菌的條件下繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)　接種環(huán)　接種環(huán)灼燒后未冷卻　未從第一區(qū)域末端開始劃線

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的過程和相關(guān)注意點(diǎn)，掌握平板劃線法的操作步驟并能夠?qū)Ξ惓��?shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行原因分析．