Question

9．由于人突變細胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常細胞中含HGPRT酶而缺乏TK，兩種細胞均不能在HAT培養(yǎng)基中生長，但可在普通培養(yǎng)基中生長．利用上述兩類細胞融合獲得雜種細胞，在雜種細胞傳代過程中，鼠的染色體被保留下來，人的染色體隨機丟失，以至最后只剩一條或幾條人染色體（如下圖，圖中數(shù)字代表保留的人染色體編號）．科研人員運用這一方法確定了胸苷激酶基因所在的染色體．分析回答：

（1）人、鼠細胞融合的原理是細胞膜具有一定的流動性．過程A常用化學(xué)誘導(dǎo)劑是PEG，與植物原生質(zhì)體融合過程相比特有的誘導(dǎo)方法是用滅活的動物病毒處理．
（2）動物細胞培養(yǎng)過程中，人工合成的培養(yǎng)基需要加入一定量的動物血清，以滿足細胞生長的需求．培養(yǎng)液中還要添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養(yǎng)箱中充入5%的CO₂氣體的主要作用是維持培養(yǎng)液適宜的pH．
（3）過程B用HAT培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，目的是篩選出人鼠融合細胞（雜種細胞）．
（4）為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細胞中，人鼠融合細胞應(yīng)在普通（填“HAT”或“普通”）培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)．為檢查雜種細胞中含有的人染色體數(shù)目和形態(tài)，最好選取有絲分裂中期（時期）的雜種細胞進行觀察．
（5）若將某次實驗獲得的各種人鼠雜種細胞分別在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后，發(fā)現(xiàn)在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細胞能夠生長，檢查雜種細胞中保留的人染色體情況如表（表中“+”表示有相應(yīng)染色體，“-”表示無相應(yīng)染色體）：

雜種細胞	保留的人染色體
	2號	3號	5號	9號	12號	17號	21號
A	+	+	+	+	-	+	-
B	-	+	-	-	+	+	-
C	+	-	+	-	+	+	+

根據(jù)表中信息，可推測人細胞中胸苷激酶基因位于17號染色體上．

Answer 1

分析 1、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較：

項目	細胞融合原理	細胞融合方法	誘導(dǎo)手段	用途
植物體細胞雜交	細胞膜的流動性，（細胞的全能性）	去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合	離心、電刺激、聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)	克服遠緣雜交不親和，獲得雜交植株
動物細胞融合	細胞膜的流動性	使細胞分散后，誘導(dǎo)細胞融合	離心、電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導(dǎo)	制備單克隆抗體的技術(shù)之一

2、動物細胞培養(yǎng)的條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．
3、分析表格：A、B、C三種雜種細胞共有的染色體是17號染色體．

解答 解：（1）動物細胞融合的原理是細胞膜具有一定的流動性．植物原生質(zhì)體融合的誘導(dǎo)方法有物理法和化學(xué)法，而誘導(dǎo)動物細胞融合的方法有物理法、化學(xué)法和生物法，因此與植物原生質(zhì)體融合過程相比，過程A特有的誘導(dǎo)方法是生物法，即用滅活的病毒處理；化學(xué)方法中利用聚乙二醇誘導(dǎo)．
（2）動物細胞培養(yǎng)過程中，人工合成的培養(yǎng)基需要加入一定量的動物血清，以滿足細胞生長的需求．培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養(yǎng)箱中充入5%的CO₂氣體的主要作用是維持培養(yǎng)液適宜的pH．
（3）過程B用HAT培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，目的是篩選出人鼠融合細胞（雜種細胞）．
（4）突變細胞和正常細胞都不能在HAT培養(yǎng)基上生長，但都能在普通培養(yǎng)基上生長，因此為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細胞中，人鼠融合細胞應(yīng)在普通培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)．有絲分裂中期，細胞中染色體形態(tài)穩(wěn)定、數(shù)目清晰，是觀察染色體形態(tài)和數(shù)目的最佳時期．
（5）在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細胞能夠生長，而A、B、C三種雜種細胞共有的染色體是17號染色體，據(jù)此可推知人細胞中胸苷激酶基因位于17號染色體上．
故答案為：
（1）細胞膜具有一定的流動性    PEG   用滅活的動物病毒處理
（2）動物血清  防止雜菌污染   維持培養(yǎng)液適宜的pH
（3）人鼠融合細胞（雜種細胞）  
（4）普通   有絲分裂中期 
（5）17

點評 本題結(jié)合圖表，考查動物細胞工程的相關(guān)知識，要求考生識記動物細胞融合的方法，能對動植物細胞融合進行比較；識記動物細胞培養(yǎng)的條件，能結(jié)合圖表中信息準確答題．