Question

14．土壤微生物分離培養(yǎng)技術在微生物環(huán)境功能研究、代謝途徑的闡明、特定功能的驗證等方面發(fā)揮著重要作用．研究者可以通過培養(yǎng)基的優(yōu)化和重新設計來達到分離土壤微生物的目的．以土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)為例，回答下列問題：
（1）為達到分離的目的，培養(yǎng)基的成分必須以尿素為唯一氮源．制作固體培養(yǎng)基時需加入瓊脂作為凝固劑．為方便計數(shù)，可用稀釋涂布平板法接種．
（2）在使用同一土壤樣品和培養(yǎng)基已滅菌的情況下，甲同學從對應10⁴倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出約200個菌落，而其他同學篩選出約50個菌落，請分析甲同學篩選出菌落較多的原因：雜菌污染、無菌操作不當．（寫出兩個原因）．
（3）在細菌分解尿素的反應中，細菌產(chǎn)生的脲酶可將尿素分解成為氨．為進一步分離得到的細菌是否可以分解尿素，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若該指示劑變紅，則可初步鑒定該細菌可以分解尿素．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)：
（1）實驗室中目的菌株的篩選
①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度．pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長．
培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的細菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌．

解答 解：（1）要從土壤中分解尿素的細菌，培養(yǎng)基的成分必須以尿素為唯一氮源．制作固體培養(yǎng)基時需加入瓊脂作為凝固劑．為方便計數(shù)，可用稀釋涂布平板法接種．
（2）在使用同一土壤樣品和培養(yǎng)基已滅菌的情況下，甲同學從對應10⁴倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出約200個菌落，而其他同學篩選出約50個菌落，則甲同學篩選出菌落較多的原因可能是雜菌污染、無菌操作不當?shù)龋?br />（3）在細菌分解尿素的反應中，細菌產(chǎn)生的脲酶可將尿素分解成為氨．為進一步分離得到的細菌是否可以分解尿素，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若該指示劑變紅，則可初步鑒定該細菌可以分解尿素．
故答案為：
（1）唯一氮源     瓊脂     稀釋涂布平板
（2）雜菌污染、無菌操作不當
（3）脲    酚紅     變紅

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)的成分、種類及功能；識記接種微生物常用的兩種方法；識記分離分解尿素的細菌的原理，能結合所學的知識準確答題．