Question

2．回答下列有關遺傳信息傳遞與表達的問題．
為制備目的基因Y（圖1）與質(zhì)粒X（圖2）的重組DNA，將質(zhì)粒X與含Y的DNA片段加入含有限制性核酸內(nèi)切酶BgⅠⅡ與BamHⅠ的反應混合物中，酶切后的片段再加入含有連接酶的反應體系中．其中，質(zhì)粒X含有l(wèi)eu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR

（1）根據(jù)圖3分別寫出BgⅠⅡ與BamHⅠ酶切后形成的末端序列：、．
（2）BgⅠⅡ酶切后的質(zhì)粒與BamHⅠ酶切后的目的基因Y能夠連接的原因是酶切后產(chǎn)生相同的黏性末端，并遵循堿基互補配對原則．
將連接后的產(chǎn)物轉化入一種Z細菌，Z細菌對卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)．
（3）使用BgⅠⅡ處理重組質(zhì)粒，可以得到A．
A．長度為3300bp的環(huán)狀DNA
B．長度為3300bp的線形DNA
C．長度為2800bp和500bp的線形DNA
D．長度為2800bp的環(huán)狀DNA
（4）要篩選含有重組質(zhì)粒的Z細胞，應選擇C．
A．卡那霉素和亮氨酸均含的培養(yǎng)基
B．卡那霉素和亮氨酸均不含的培養(yǎng)基
C．含卡那霉素但不含亮氨酸的培養(yǎng)基
D．含亮氨酸但不含卡那霉素的培養(yǎng)基．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）限制酶BgⅠⅡ與BamHⅠ的識別序列及切割位點如圖：，因此它們切割形成的末端序列依次為：、．
（2）BgⅠⅡ酶切后的質(zhì)粒與BamHⅠ酶切后的目的基因Y具有相同的黏性末端，根據(jù)堿基互補配對原則，它們能夠連接形成重組DNA．
（3）BgⅠⅡ酶切后的質(zhì)粒與BamHⅠ酶切后的目的基因形成的重組DNA分子上沒有BgⅠⅡ酶的識別序列，因此使用BgⅠⅡ處理重組質(zhì)粒，可以得到長度為3300bp的環(huán)狀DNA．
（4）由于質(zhì)粒X含有l(wèi)eu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR，因此要篩選含有重組質(zhì)粒的Z細胞，應選擇含卡那霉素但不含亮氨酸的培養(yǎng)基．
故答案為：
（1）    
（2）酶切后產(chǎn)生相同的黏性末端，并遵循堿基互補配對原則
（3）A
（4）C

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合圖中及題中信息準確答題．