Question

14．雌雄同株植物擬南芥是遺傳學(xué)研究的常用材料，野生型擬南芥的種皮為褐色（AA），突變型的種皮為黃色（aa）．某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將蘿卜體內(nèi)的一個A₀基因（控制紅色種皮）定向插入野生型擬南芥的M基因中（M基因與種皮顏色無關(guān)，A基因與M基因在染色體上的位置關(guān)系如圖），通過培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株X．
（1）基因工程的操作過程中，蘿卜A₀基因與運載體DNA與同種限制酶切割后，黏性末端可以相互黏合，這種黏合只能使互補的堿基連接起來．
（2）轉(zhuǎn)基因植株X產(chǎn)生配子的過程中，四分體時期含有2個A₀基因，A₀基因與正常M基因的分離發(fā)生在減數(shù)第一次分裂后期．
（3）研究發(fā)現(xiàn)a基因是A基因發(fā)生一個堿基對的替換后形成的，這種變異稱基因突變．基因表達時，以DNA一條鏈為模板合成mRNA的過程稱為轉(zhuǎn)錄．若A基因形成的mRNA末端序列為“-AGCGCGACCAGACUCUAA-”，且A比a多編碼2個氨基酸，由此可知，突變后替換位置的堿基對是A/T（或T/A）（（起始密碼位置相同，UGA、UAA為終止密碼）．
（4）研究人員進一步研究發(fā)現(xiàn)，A₀基因插入M基因中會導(dǎo)致M基因功能喪失．為了推測M基因的功能，研究人員利用轉(zhuǎn)基因植株X設(shè)計了如下的實驗：

親本	子代種皮顏色及比例
植株X（♀）×野生型（♂）	紅色：褐色≈1：1
植株X（♂）×野生型（♀）	全為褐色

由實驗結(jié)果推測，植株X產(chǎn)生的雄配子所含控制種皮顏色的基因是A，進而推測基因M的功能可能與雄配子的正常發(fā)育（或花粉的活性）有關(guān)．A₀基因相對于A基因為顯 性，若植株X自交，子代中紅色種皮植株所占的比例$\frac{1}{2}$．
（5）擬南芥的葉片正常對葉片卷曲為顯性，葉形與種皮性狀獨立遺傳．轉(zhuǎn)基因植株X葉片卷曲，用它做母本與純合正常的突變型植株雜交得到F₁，再將F₁中紅色種皮植株自交得到F₂，F(xiàn)₂中表現(xiàn)型為紅色種皮正常葉的植株所占的比例是$\frac{3}{8}$．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、分析表格：當(dāng)母本為植株X時，后代比例符合測交的結(jié)果；當(dāng)父本為植株X時其后代都是褐色，說明植株X含有A₀基因的花粉致死，又因為插入M基因中會導(dǎo)致M基因功能喪失，由此可以推測M基因可能與雄配子的正常發(fā)育有關(guān)，且A₀基因（紅色）相對于A基因（褐色）為顯性，則植株X產(chǎn)生的雄配子所含控制種皮顏色的基因是A．

解答 解：（1）基因工程的操作過程中，構(gòu)建基因表達載體時，應(yīng)該用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，以產(chǎn)生相同的黏性末端；黏性末端可以相互黏合，但這種黏合只能使互補的堿基連接起來．
（2）轉(zhuǎn)基因植株X是將蘿卜體內(nèi)的一個A基因定向插入野生型擬南芥的M基因中再通過培養(yǎng)獲得的，即轉(zhuǎn)基因植株X的體細胞中只含有1個A₀基因．經(jīng)過減數(shù)第一次分裂間期的復(fù)制，在四分體時期（減數(shù)第一次分裂前期），細胞中含有2個A₀基因；A基因與正常M基因位于一對同源染色體上，它們的分離發(fā)生在減數(shù)第一次分裂后期，隨著同源染色體的分開而分離．
（3）基因突變是指基因中堿基對的增添、缺失或替換，因此a基因是A基因發(fā)生基因突變后形成的．基因表達包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個步驟，其中轉(zhuǎn)錄是以DNA-條鏈為模板合成mRNA的過程．a(chǎn)基因和A基因形成的mRNA中起始密碼位置相同，且A比a多編碼2個氨基酸，又已知終止密碼為UGA、UAA，若A基因形成的mRNA末端序列為“-AGCGCGACCAGACUCUAA”，則由此可知，A基因倒數(shù)第9個堿基突變后，相應(yīng)的密碼子由AGA變?yōu)閁GA，即替換位置的堿基對是A/T（或T/A）．
（4）測交實驗可以驗證F₁產(chǎn)生的配子種類及比例．由實驗結(jié)果可知，當(dāng)母本為植株X時，后代比例符合測交的結(jié)果；當(dāng)父本為植株X時其后代都是褐色，說明植株X含有A₀基因的花粉致死，因為插入M基因中會導(dǎo)致M基因功能喪失，由此可以推測M基因可能與雄配子的正常發(fā)育有關(guān)，且A₀基因（紅色）相對于A基因（褐色）為顯性，則植株X產(chǎn)生的雄配子所含控制種皮顏色的基因是A．若植株X自交（A₀AMM），由于含有A₀基因的花粉致死，則子代中紅色種皮植株：褐色種皮植株=1：1，即紅色種皮植株所占的比例$\frac{1}{2}$．
（5）擬南芥的葉片正常對葉片卷曲為顯性（用B、b表示），葉形與種皮性狀獨立遺傳．轉(zhuǎn)基因植株X葉片卷曲（A₀Abb），用它做母本與純合葉片正常的突變型植株（aaBB）雜交得到F₁（紅色正常葉A₀aBb、褐色正常葉AaBb），再將F₁中紅色種皮植株（A₀aBb）自交得到F₂，由于含有A₀基因的花粉致死，F(xiàn)₂中表現(xiàn)型為紅色種皮正常葉的植株所占的比例是$\frac{1}{2}×\frac{3}{4}=\frac{3}{8}$．
故答案為：
（1）限制   互補的堿基
（2）2  減數(shù)第一次分裂后
（3）基因突變   轉(zhuǎn)錄   A/T（或T/A）（2分）
（4）A   雄配子的正常發(fā)育（或花粉的活性）  顯   $\frac{1}{2}$
（5）$\frac{3}{8}$

點評 本題考查基因工程、基因自由組合定律的實質(zhì)及應(yīng)用，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各步驟中需要注意的細節(jié)問題；掌握基因自由組合定律的實質(zhì)，能根據(jù)表中信息判斷基因的顯隱性關(guān)系及M基因的作用，關(guān)鍵是明確A₀基因的花粉致死，再緊扣該信息進行相關(guān)概率的計算，屬于難題．