Question

20．在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長．如圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程．請(qǐng)據(jù)圖回答：
（1）基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定．
（2）A過程需要的酶有限制酶和DNA連接酶．
（3）要把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用Ca²⁺處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)楦惺軕B(tài)；然后將重組質(zhì)粒和感受細(xì)胞在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過程．
（4）目的基因能否在棉花植株體內(nèi)維持和表達(dá)其遺傳特性的關(guān)鍵是目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA分子上．這需要通過檢測才能知道，檢測采用的方法是DNA分子雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示獲得抗蟲棉的技術(shù)流程圖，首先采用基因工程技術(shù)將抗蟲基因?qū)�入離體棉花葉片組織，其過程為：獲取目的基因（抗蟲基因）→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌→用含有卡那霉素的選擇培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌→利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入離體棉花葉片組織細(xì)胞．其次采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，將導(dǎo)入抗蟲基因的細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因抗蟲植株，其過程主要包括脫分化和再分化兩個(gè)步驟．

解答 解：（1）基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定．
（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA連接酶．
（3）如果受體細(xì)胞為細(xì)菌，需用Ca ²⁺處理細(xì)菌，使細(xì)菌轉(zhuǎn)變?yōu)楦惺軕B(tài)，然后將重組質(zhì)粒和感受細(xì)胞放在緩沖液中完成轉(zhuǎn)化過程．
（4）目的基因在棉花植株內(nèi)維持和表達(dá)其遺傳特性的關(guān)鍵是目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA分子上，需通過DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體構(gòu)建 目的基因的檢測與鑒定
（2）限制酶   DNA連接酶 
（3）Ca²⁺感受  重組質(zhì)粒和感受細(xì)胞
（4）目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA分子上   DNA分子雜交技術(shù)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗蟲植株的培育過程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱；識(shí)記質(zhì)粒作為運(yùn)載體的條件；掌握目的基因檢測與鑒定的方法等．