Question

（7分）重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過(guò)寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，通過(guò)多次PCR擴(kuò)增，從而獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴(kuò)增較長(zhǎng)片段的DNA、不同來(lái)源的DNA片段拼接、基因的定點(diǎn)誘變等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。右圖是利用重疊延伸PCR技術(shù)擴(kuò)增某目的基因的過(guò)程。其主要沒(méi)計(jì)思路是用具有互補(bǔ)配對(duì)片段的引物（圖中引物2、引物3），分別PCR，獲得有重疊鏈的兩種 DNA片段，再在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過(guò)重疊鏈的延伸獲得目的基因。結(jié)合所學(xué)知識(shí)，分析下列問(wèn)題。

(1)引物中G+C的含量影響著引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性，引物中G+C的含量越高，結(jié)合穩(wěn)定性                。

(2)在第一階段獲得兩種具有重疊片段DNA 的過(guò)程中，必須將引物l、2和引物3、4  置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中，這是因?yàn)?u>                                                  。

(3)引物l、引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、引物4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進(jìn)行一次復(fù)制，共產(chǎn)生         種雙鏈DNA分子。

(4)在引物1、引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)        次復(fù)制。

(5)若利用微生物擴(kuò)增該目的基因，其基本步驟包括：           、               、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取目的基因。

 

Answer 1

【答案】

（1）越高（2）引物2和引物3存在互補(bǔ)配對(duì)片段，置于同一反應(yīng)系統(tǒng)中它們會(huì)發(fā)生結(jié)合而失去作用（2分）（3）3（4）2（5）目的基因與載體結(jié)合  將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞

【解析】

試題分析：（1）G+C中有三個(gè)氫鍵，所以引物中G+C的含量越高，結(jié)合穩(wěn)定性越高。（2）引物2和引物3存在互補(bǔ)配對(duì)片段，置于同一反應(yīng)系統(tǒng)中它們會(huì)發(fā)生結(jié)合而失去作用，所以必須將引物l、2和引物3、4  置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中。（3）由圖分析可知，共可以形成3種雙鏈DNA。(4) 在引物1、引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)2次復(fù)制。（5）擴(kuò)增目的基因的基本步驟包括的基因與載體結(jié)合、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取目的基因。

考點(diǎn)：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。