Question

如圖為大腸桿菌的試驗過程，據(jù)圖回答下列問題：

（1）步驟①和②中常用的工具酶是

 

和

 

．
（2）圖中質粒上有抗氨芐青霉素和抗四環(huán)素兩個標記基因，經過①和②步驟后，有些質粒上的

 

基因內插入了外源目的基因，形成重組質粒，由于目的基因的分隔使得該抗性基因失活．
（3）步驟③是

 

的過程，為了促進該過程，應該用

 

處理大腸桿菌．
（4）步驟④：將三角瓶內的大腸桿菌接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基C上培養(yǎng)，目的是篩選

 

，能在C中生長的大腸桿菌有

 

種．
（5）步驟⑤：用無菌牙簽桃取C上的單個菌落，分別接種到D（含氨芐青霉素和四環(huán)素）和E（含四環(huán)素）兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示．含目的基因的菌落位于

 

（填D或E）上，請在圖中相應的位置上圈出來．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：分析題圖：圖示為大腸桿菌的試驗過程，其中①表示用限制酶切割質粒；②表示基因表達載體的構建過程；③表示將目的基因導入受體細胞；④⑤表示目的基因的檢測和表達．

解答： 解：（1）步驟①需要用限制酶切割質粒；步驟②中需用DNA連接酶將目的基因和質粒連接形成重組質粒．
（2）由圖可知，經過①和②步驟后，有些質粒上的氨芐青霉素抗性基因內插入了外源目的基因，使得該抗性基因失活．
（3）步驟③是將重組質粒（目的基因）導入大腸桿菌的過程；將目的基因導入微生物細胞常用感受態(tài)細胞法，即用CaCl₂溶液處理微生物細胞，使之處于易于吸收周圍環(huán)境中的感受態(tài)．
（4）步驟④：將三角瓶內的大腸桿菌接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基C上培養(yǎng)，目的是篩選含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌，能在C中生長的大腸桿菌有2種，即導入普通質粒的大腸桿菌、導入重組質粒的大腸桿菌．
（5）含有重組質粒的大腸桿菌能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中生存，但不能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生存，因此含目的基因的菌落位于E上，如圖所示：．
故答案為：
（1）限制性核酸內切酶  DNA連接酶
（2）氨芐青霉素抗性基因
（3）將重組質粒（目的基因）導入大腸桿菌（受體細胞）     CaCl₂溶液
（4）含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌（含抗性基因的大桿菌給分，但回答含目的基因的大腸桿菌不給分）               2
（5）E

點評：本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各步驟中的相關細節(jié)，能正確分析流程圖，再結合所學的知識準確答題．