Question

【題目】家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力。將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。

（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用________酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細(xì)胞。

（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的__________和__________之間。導(dǎo)入家蠶細(xì)胞后若要檢測干擾素基因在家蠶細(xì)胞中是否表達(dá)，可以采用的方法有___________________。

（3）培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時，貼壁生長的細(xì)胞會產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以_________________，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換。

（4）“�；�魚塘”生態(tài)系統(tǒng)能充分利用廢棄物中的能量，形成“無廢棄物農(nóng)業(yè)”，這主要是遵循生態(tài)工程的__________原理。同時，通過飼養(yǎng)家禽、家畜，栽培食用菌，提高農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入，使保護(hù)環(huán)境和發(fā)展經(jīng)濟(jì)相互協(xié)調(diào)，這又體現(xiàn)了生態(tài)工程的_________原理。

Answer 1

【答案】胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 啟動子 終止子 分子雜交技術(shù)和抗原-抗體雜交法 增大細(xì)胞貼壁生長的附著面積 物質(zhì)循環(huán)再生 整體性

【解析】

1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測與表達(dá)．從分子水平上檢測目的基因的方法：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA用分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)用抗原-抗體雜交技術(shù)。

2、PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）等。
3、生態(tài)工程原理：
（1）物質(zhì)循環(huán)再生原理：物質(zhì)能在生態(tài)系統(tǒng)中循環(huán)往復(fù)，分層分級利用；
（2）物種多樣性原理：物種繁多復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)具有較高的抵抗力穩(wěn)定性；
（3）協(xié)調(diào)與平衡原理：生態(tài)系統(tǒng)的生物數(shù)量不能超過環(huán)境承載力（環(huán)境容納量）的限度；
（4）整體性原理：生態(tài)系統(tǒng)建設(shè)要考慮自然、經(jīng)濟(jì)、社會的整體影響；
（5）系統(tǒng)學(xué)和工程學(xué)原理：系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)決定功能原理：要通過改善和優(yōu)化系統(tǒng)結(jié)構(gòu)改善功能；
系統(tǒng)整體性原理：系統(tǒng)各組分間要有適當(dāng)?shù)谋壤�關(guān)系，使得能量、物質(zhì)、信息等的轉(zhuǎn)換和流通順利完成，并實現(xiàn)總體功能大于各部分之和的效果，即“1+1＞2”。

（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)時，需要用胰蛋白酶處理動物組織，以便獲得單個細(xì)胞；

（2）基因表達(dá)載體包括啟動子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因。啟動子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端，故為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動子和終止子之間；基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個步驟，要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，可采用分子雜交技術(shù)，要檢測目的基因是否翻譯，可采用抗原-抗體雜交法；

（3）培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時，貼壁生長的細(xì)胞會產(chǎn)生接觸抑制，通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以增大細(xì)胞貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換；

（4）“�；�魚塘”生態(tài)系統(tǒng)能充分利用廢棄物中的能量，形成“無廢棄物農(nóng)業(yè)”，這主要是遵循生態(tài)工程的物質(zhì)循環(huán)再生原理；同時，通過飼養(yǎng)家禽、家畜，栽培食用菌，提高農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入，使保護(hù)環(huán)境和發(fā)展經(jīng)濟(jì)相互協(xié)調(diào)，這又體現(xiàn)了生態(tài)工程的整體性原理。