Question

【題目】如圖表示血紅蛋白提取和分離的部分實驗裝置，請據(jù)圖回答下列問題：

（1）甲裝置中，B是血紅蛋白溶液，則A是____________。乙裝置中，C溶液的作用是___________。

（2）通過凝膠色譜法可將從紅細胞中分離出的血紅蛋白樣品進一步________。

（3）在血紅蛋白的提取和分離實驗中有以下操作：

①實驗時要對采集到的血液中的紅細胞進行洗滌，其主要目的是________________。

②在蒸餾水和________的作用下，紅細胞會破裂釋放出血紅蛋白。

③將釋放出的血紅蛋白收集到透析袋中透析，這是樣品的______，而透析的目的是______。

（4）用乙裝置分離血紅蛋白，待___________________________時，用試管收集流出液，每5 mL收集一管，連續(xù)收集。實驗最后經(jīng)過SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳進行________。

Answer 1

【答案】磷酸緩沖液 洗脫血紅蛋白（洗脫） 純化 去除雜蛋白 甲苯 粗分離 去除樣品中相對分子質量較小的雜質 紅色的蛋白質接近色譜柱底端 純度鑒定

【解析】

1、蛋白質的提取和分離：

（1）原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質量的大小來分離蛋白質的有效方法，相對分子質量小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程長，移動的速度慢，相對分子質量大的蛋白質不容易進入凝膠內部的通道，路程短，移動的速度快，因此相對分子質量不同的蛋白質得以分離。

（2）用磷酸緩沖液處理的目的是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內，維持其結構和功能。

（3）分離血紅蛋白溶液時，將攪拌好的混合液轉移到離心管中，經(jīng)過中速長時離心后，可明顯看到試管中溶液分為4層，從上往下數(shù)，第1層為甲苯層，第2層為脂溶性物質的沉淀層，第3層為血紅蛋白水溶液，第4層為雜質沉淀層。

（4）氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果。

2、血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：

（1）樣品處理：①紅細胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白溶液；

（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析；

（3）純化：調節(jié)緩沖液面→加入蛋白質樣品→調節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質；

（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

3、電泳法是利用待測樣品中各種分子帶電性質的差異和分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離或鑒定。

（1）透析是將血紅蛋白溶液裝入透析袋，放入A磷酸緩沖液。乙裝置中C是磷酸緩沖液，溶液的作用是洗脫血紅蛋白。

（2）通過凝膠色譜法可將從紅細胞中分離出的血紅蛋白樣品進一步純化。

（3）在血紅蛋白的提取和分離實驗中有以下操作：

①實驗時要對采集到的血液中的紅細胞進行洗滌，其主要目的是去除雜蛋白；②在蒸餾水和甲苯的作用下，紅細胞會破裂釋放出血紅蛋白；③將釋放出的血紅蛋白收集到透析袋中透析，這是樣品的粗分離，而透析的目的是去除樣品中相對分子質量較小的雜質。

（4）用乙裝置分離血紅蛋白，待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每5 mL收集一管，連續(xù)收集。實驗最后經(jīng)過SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳進行鑒定。