Question

16．某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活（Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因）．有人將此質(zhì)粒載體用BamHI酶切后，與用BamHI酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化．被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌．回答下列問題：
（1）基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來自于受體細(xì)胞
（2）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一至多個(gè)限制酶切位點(diǎn)（答出兩點(diǎn)即可）．
（3）如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的細(xì)胞是含有質(zhì)粒載體和含插入了目的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)胞．在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有是四環(huán)素的固體培養(yǎng)基．

Answer 1

分析 運(yùn)載體：
（1）常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．（質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子．）
（2）作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點(diǎn)； ②要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來．
（3）天然的質(zhì)粒不能直接作為載體，基因工程中用到的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的．

解答 解：（1）噬菌體屬于病毒，病毒沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，其DNA復(fù)制所需的原料來自于受體細(xì)胞．
（2）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)、能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存．
由于未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的大腸桿菌中不含有氨芐青霉素抗性基因，因此如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的（3）質(zhì)粒載體用BamHI酶切后，四環(huán)素抗性基因被破壞，但氨芐青霉素抗性基因完好，因此如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的細(xì)胞是含有質(zhì)粒載體和含插入了目的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)胞．在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基，即含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌在其中不能生長(zhǎng)，而含有普通質(zhì)粒的大腸桿菌能生長(zhǎng)．
故答案為：
（1）受體細(xì)胞
（2）能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一至多個(gè)限制酶切位點(diǎn)
（3）含有質(zhì)粒載體      含插入了目的基因的重組質(zhì)粒        四環(huán)素

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記質(zhì)粒作為運(yùn)載體的條件，掌握目的基因檢測(cè)和鑒定的方法，再結(jié)合題干信息準(zhǔn)確分析．