Question

（12分）2008年諾貝爾化學(xué)獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻的科學(xué)家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)部的移動情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。下圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，據(jù)圖回答：

（1）圖中通過過程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G^↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是—^↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有1個酶Ⅱ的切點。

①請畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

                                                                                                 。

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來         ，理由是：                                         。

（2）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細胞時，采用的方法是                 _。

（3）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是                                      。獲得的轉(zhuǎn)基因克隆豬，可以解決的醫(yī)學(xué)難題是，可以避免發(fā)生                     反應(yīng)。

（4）目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：               （用數(shù)字表示）。

①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸 

②藍色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計序列

③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）

④表達出藍色熒光蛋白。

 

Answer 1

【答案】

（12分）（1）①    2分

②可以連接   因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互補的）2分

（2）顯微注射技術(shù)

（3）為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因2分   發(fā)生免疫排斥反應(yīng)2分

（4）②①③④ 2分

【解析】限制酶識別特定的核苷酸序列，并在特定的切割位點切割，產(chǎn)生粘性末端。限制酶Ⅰ和Ⅱ切割后產(chǎn)生的粘性末端相同，即均產(chǎn)生GATC序列，因此可以用DNA連接酶連接起來，目的基因?qū)�入動物細胞最常用、最有效的方法是顯微注射法。標記基因可以檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞。用轉(zhuǎn)基因克隆豬進行器官移植等醫(yī)學(xué)難題，可以避免入情入理免疫排斥反應(yīng)。