Question

18．轉(zhuǎn)基因重組酵母乙肝疫苗是一種乙肝表面抗原（HbsAg）亞單位疫苗，它采用轉(zhuǎn)基因的方法將乙肝病毒表達(dá)表面抗原的基因進(jìn)行質(zhì)粒構(gòu)建，轉(zhuǎn)入啤酒酵母菌中，通過培養(yǎng)這種重組酵母菌來表達(dá)乙肝表面抗原亞單位．轉(zhuǎn)基因酵母的產(chǎn)生過程如圖1所示．質(zhì)粒上有SnaBⅠ、AvrⅡ、SacⅠ、BglⅡ四種限制性酶切割位點(diǎn)，且酶切序列如表所示．請回答：

限制酶	識別序列及酶切位點(diǎn)
SnaBⅠ
AvrⅡ
SacⅠ
BglⅡ

（1）由于HBsAg基因序列已知，因此過程①可通過PCR技術(shù)得到大量HBsAg基因，此外也可將其連接在 
質(zhì)粒上，通過大腸桿菌培養(yǎng)擴(kuò)增．
（2）構(gòu)建含抗病基因的重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用限制性核酸內(nèi)切酶B、D（不定項(xiàng)選擇）（A．SnaBⅠB．AvrⅡC．SacⅠD．BglⅡ）對含HBsAg基因的DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割，切割一個(gè)含HBsAg基因的DNA分子需要消耗
4個(gè)水分子．
（3）不同的微生物通常需要不同的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，已知釀酒酵母培養(yǎng)基配方為：酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，定容至1L，加入1.5%瓊脂粉制成固體培養(yǎng)基．則其滅菌條件應(yīng)為A．
A．高壓蒸汽滅菌法，且溫度為121℃，壓力為1kg/cm²，滅菌15分鐘
B．高壓蒸汽滅菌法，且溫度為95℃，壓力為500g/cm²，滅菌30分鐘
C．將配好的培養(yǎng)基放在超凈臺中，打開紫外燈和過濾風(fēng)，滅菌30分鐘
D．在超凈臺中，打開過濾風(fēng)，在酒精燈火焰旁用G6玻璃砂漏斗過濾滅菌
（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌后，可用涂布分離法接種到固體培養(yǎng)基上．某同學(xué)在接種后得到如圖2所示的菌落分布，推測該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是涂布不均勻．若欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入HBsAg基因的酵母菌，則應(yīng)使重組質(zhì)粒中含有抗卡那霉素基因作為標(biāo)記基因，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（5）已知酵母菌的最適培養(yǎng)溫度是28℃，在培養(yǎng)時(shí)可將培養(yǎng)皿倒置并放入恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)．若不倒置培養(yǎng)將導(dǎo)致無法形成單菌落．

Answer 1

分析 分析圖表：形成重組質(zhì)粒時(shí)，需要用同種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，圖中看到目的基因上含有4種限制酶切割位點(diǎn)，但是SacⅠ酶的切割位點(diǎn)存在于目的基因中間，不能選用．而SnaBⅠ酶切割的是平末端，DNA連接酶的連接效率不高，因此應(yīng)選用AvrⅡ和BglⅡ兩種限制酶構(gòu)建重組質(zhì)粒．

解答 解：（1）通過PCR技術(shù)可大量獲取目的基因，此外也可將其連接在質(zhì)粒上，通過大腸桿菌培養(yǎng)擴(kuò)增．
（2）形成重組質(zhì)粒時(shí)，需要用同種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，圖中看到目的基因上含有4種限制酶切割位點(diǎn)，但是SacⅠ酶的切割位點(diǎn)存在于目的基因中間，不能選用．而SnaBⅠ酶切割的是平末端，DNA連接酶的連接效率不高，因此應(yīng)選用AvrⅡ和BglⅡ兩種限制酶構(gòu)建重組質(zhì)粒．切割一個(gè)含HBsAg基因的DNA分子需要斷裂4個(gè)磷酸二酯鍵，因此需要消耗4個(gè)水分子．
（3）培養(yǎng)基一般選擇高壓蒸汽滅菌，其條件為壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min，故選：A．
（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌后，可用涂布分離法接種到固體培養(yǎng)基上．某同學(xué)在接種后得到如圖2所示的菌落分布，推測該同學(xué)接種時(shí)可能涂布不均勻．若欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入HBsAg基因的酵母菌，則應(yīng)使重組質(zhì)粒中含有抗卡那霉素基因作為標(biāo)記基因，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（5）已知酵母菌的最適培養(yǎng)溫度是28℃，在培養(yǎng)時(shí)可將培養(yǎng)皿倒置并放入恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)．若不倒置培養(yǎng)將導(dǎo)致無法形成單菌落．
故答案為：
（1）PCR技術(shù)       質(zhì)粒
（2）B、D        4
（3）A
（4）涂布分離     涂布不均勻     抗卡那霉素基因        選擇
（5）恒溫培養(yǎng)箱          無法形成單菌落

點(diǎn)評 本題結(jié)合圖表，考查基因工程和微生物的分離與純化的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、適宜的工具及具體的操作步驟，能結(jié)合圖中和表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱理解和應(yīng)用層次的考查．