3．(2012·江蘇，32)圖①表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列，圖②表示一種質粒的結構和部分堿基序列�，F(xiàn)有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C^↓CGG、G^↓GATCC、^↓GATC、CCC^↓GGG。請回答下列問題：

(1)圖①的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由________________________連接。

(2)若用限制酶Sma Ⅰ完全切割圖①中DNA片段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長度為________________________。

(3)若圖①中虛線方框內的堿基對被T—A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d。從雜合子中分離出圖①及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長度的DNA片段。

(4)若將圖②中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是________。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。

2．(2012·天津理綜)黃曲霉毒素B₁(AFB₁)存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過食物鏈進入動物體內并蓄積，引起癌變。某些微生物能表達AFB₁解毒酶，將該酶添加在飲料中可以降解AFB₁，清除其毒性�；卮鹣铝袉栴}：

(1)AFB₁屬于________類致癌因子。

(2)AFB₁能結合在DNA的G上，使該位點受損傷變?yōu)镚^*，在DNA復制中，G^*會與A配對�，F(xiàn)有受損傷部位的序列為，經(jīng)兩次復制后，該序列突變?yōu)開_______。

(3)下圖為采用基因工程技術生產(chǎn)AFB₁解毒酶的流程圖。

據(jù)圖回答問題：

①在甲、乙條件下培養(yǎng)含AFB₁解毒酶基因的菌株，經(jīng)測定，甲菌液細胞密度小、細胞含解毒酶；乙菌液細胞密度大、細胞不含解毒酶。過程Ⅰ應選擇________菌液的細胞提取總RNA，理由是_____________________________________________________________。

②過程Ⅱ中，與引物結合的模板是____________________________________________________________。

③檢測酵母工程菌是否合成了AFB₁解毒酶，應采用________方法。

(4)選取不含AFB₁的飼料和某種實驗動物為材料，探究該AFB₁解毒酶在飼料中的解毒效果。實驗設計及測定結果見下表。

據(jù)表回答問題：

①本實驗的兩個自變量分別為_____________________________。

②本實驗中，反映AFB₁解毒酶解毒效果的對照組是________。

③經(jīng)測定，某污染飼料中AFB₁含量為100 μg/kg，則每千克飼料應添加________克AFB₁解毒酶，解毒效果最好，同時節(jié)約了成本。

(5)采用蛋白質工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發(fā)，設計預期的蛋白質結構，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的________序列。

1.(2012·浙江理綜)天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B�，F(xiàn)用基因工程技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是(　　)

A．提取矮牽牛藍色花的mRNA，經(jīng)逆轉錄獲得互補的DNA，再擴增基因B

B．利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因B

C．利用DNA聚合酶將基因B與質粒連接后導入玫瑰細胞

D．將基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞

9．科學家通過基因工程方法，將蘇云金芽孢桿菌的Bt毒蛋白基因轉入普通棉株細胞內，并成功實現(xiàn)了表達，從而培育出了能抗棉鈴蟲的棉花植株——抗蟲棉。其過程大致如圖所示：

(1)基因工程的操作程序主要包括的四個步驟是______________、______________、______________、______________。

(2)Ti質粒是農(nóng)桿菌中的一種質粒，其上有T­DNA，能把目的基因插入Ti質粒的T­DNA中是利用了T­DNA__________________的特點。

(3)Bt毒蛋白基因轉入普通棉株細胞中并成功實現(xiàn)表達的過程，在基因工程中稱為__________。

(4)將目的基因導入受體細胞的方法有很多種，該題中涉及的是__________。

(5)目的基因能否在棉株體內穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性的關鍵是________________________，這需要通過檢測才能知道，檢測采用的方法是________________________________________________。

8．(江蘇省黃橋中學2012屆高三月考)組建理想的載體需要對天然的質粒進行改造�？茖W家在體外構建的大腸桿菌的一種質粒只有某限制酶的一個識別序列，位于該質粒的lacZ基因中。lacZ基因若無外源基因插入，便可表達出半乳糖苷酶。當培養(yǎng)基中含有兩種物質I和X時，X便會被半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落。如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有該種質粒的大腸桿菌便不能表達半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的X不會被水解成藍色，大腸桿菌將形成白色菌落。體外構建的這種大腸桿菌質粒還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。下圖是利用lacZ基因的插入失活、篩選出重組質粒的示意圖。據(jù)圖回答下列問題：

(1)作為受體大腸桿菌應______________(填“含有”或“不含”)氨芐青霉素抗性基因，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。取用氯化鈣溶液處理過的受體大腸桿菌，置于試管Ⅱ中，完成基因工程操作的______________________________步驟。

(2)圖中的選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質外，還應加入__________________________________等物質，用以篩選導入了重組質粒的受體大腸桿菌。

(3)將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以檢測受體大腸桿菌是否導入重組質粒，請預測菌落的顏色，并分析結果：

①_______________________________________________。

②_______________________________________________。

(4)若改用噬菌體為運載體，科學家分別用³²P、³⁵S標記噬菌體內的目的基因、外殼，在下圖中標記元素³²P、³⁵S所在部位依次是________________(填圖中標號)。

7．如圖為利用生物技術獲得生物新品種的過程，據(jù)圖回答：

(1)在基因工程中，A→B為__________技術，利用的原理是__________，其中①為__________過程。

(2)加熱至94 ℃的目的是使DNA中的__________鍵斷裂，這一過程在細胞內是通過__________的作用來完成的。

(3)當溫度降低時，引物與模板互補結合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板鏈延伸，最終合成兩個DNA分子，此過程中原料是__________，遵循的原則是__________。

(4)目的基因導入綿羊受體細胞常用__________技術。

(5)B→D為抗蟲棉的培育過程，其中④過程常用的方法是__________，要確定目的基因(抗蟲基因)導入受體細胞后，是否能穩(wěn)定遺傳并表達，需進行檢測和鑒定工作，請寫出在個體生物學水平上的鑒定過程：__________。

6．如圖為DNA分子的切割和連接過程：

(1)EcoRⅠ是一種__________酶，其識別序列是__________，切割點是__________與__________之間的__________鍵。切割結果產(chǎn)生的DNA片段末端形式為__________。

(2)不同來源DNA片段結合，在這里需要的酶應是__________連接酶，此酶是通過在__________與__________之間形成__________鍵，而起“縫合”作用的。還有一種連接平末端的連接酶是__________。

5．(杭州高中2012屆月考)下圖為重組質粒形成示意圖。將此重組質粒導入大腸桿菌，然后將大腸桿菌放在四種培養(yǎng)基中培養(yǎng)：a－無抗生素的培養(yǎng)基，b－含四環(huán)素的培養(yǎng)基，c－含氨芐青霉素的培養(yǎng)基，d－含四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基。含重組質粒的大腸桿菌能生長的是(　　)

A．a(chǎn)　　　　　　　　　    B．a(chǎn)和c

C．a(chǎn)和b                              D．b和c

4．(2011·四川卷)北極比目魚中有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白具有11個氨基酸的重復序列，該序列重復次數(shù)越多，抗凍能力越強。下圖是獲取轉基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關敘述正確的是(　　)

A．過程①獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測序

B．將多個抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達的新基因，不能得到抗凍性增強的抗凍蛋白

C．過程②構成的重組質粒缺乏標記基因，需要轉入農(nóng)桿菌才能進行篩選

D．應用DNA探針技術，可以檢測轉基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達

3．(2011·浙江卷)將ada(腺苷酸脫氨酶基因)通過質粒pET28b導入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是(　　)

A．每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質粒

B．每個重組質粒至少含一個限制性核酸內切酶識別位點

C．每個限制性核酸內切酶識別位點至少插入一個ada

D．每個插入的ada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子