Question

【題目】Ⅰ.某實(shí)驗(yàn)小組欲從豆油污染的土壤中篩選出能高效降解脂肪的菌株。請(qǐng)回答：

（1）在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基。

（2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈______狀態(tài)放置。為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過(guò)高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行______處理。

（3）為了排除______，需設(shè)置接種______的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

（4）為了篩選出菌株，可將適量的______試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是______，則說(shuō)明此種菌能夠分泌脂肪酶。

（5）純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，可采用______法接種于新的平板上，然后用接種環(huán)挑取單菌落至空白斜面，最后置于______中保存。

Ⅱ.天津獨(dú)流老醋歷史悠久、獨(dú)具風(fēng)味，其生產(chǎn)工藝流程如下圖。

(1)在糖化階段添加酶制劑需要控制反應(yīng)溫度，這是因?yàn)槊?/span>_____________________。

(2)在酒精發(fā)酵階段，需添加酵母菌。在操作過(guò)程中，發(fā)酵罐先通氣，后密閉。通氣能提高________的數(shù)量，有利于密閉時(shí)獲得更多的酒精產(chǎn)物。

(3)在醋酸發(fā)酵階段，獨(dú)流老醋采用獨(dú)特的分層固體發(fā)酵法，發(fā)酵30天。工藝如下：

①發(fā)酵過(guò)程中，定期取樣測(cè)定醋酸桿菌密度變化，趨勢(shì)如圖。據(jù)圖分析，與顛倒前相比，B層醋酸桿菌在顛倒后密度變化的特點(diǎn)是____________________，由此推測(cè)，影響醋酸桿菌密度變化的主要環(huán)境因素是____________________（不止一個(gè)）。

②乳酸含量高是獨(dú)流老醋風(fēng)味獨(dú)特的重要成因。發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵缸中_______________層的醋醅有利于乳酸菌繁殖，積累乳酸。

③成熟醋醅中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是發(fā)酵后期營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗等環(huán)境因素的改變，加劇了不同種類乳酸菌的__________，淘汰了部分乳酸菌種類。

Answer 1

【答案】 豆油 選擇 倒置 稀釋 過(guò)程中的雜菌干擾 等量無(wú)菌水 蘇丹Ⅲ 透明圈 劃線分離（涂布分離） 冰箱 在最適溫度條件下催化能力最強(qiáng) 酵母菌 先快速增長(zhǎng)后趨于穩(wěn)定 氧氣、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、pH 顛倒前的B層和顛倒后的A（或不翻動(dòng)，或下） 種間競(jìng)爭(zhēng)（或競(jìng)爭(zhēng)）

【解析】試題分析：培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽；常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法；接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。參與果酒制作的微生物是酵母菌，其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型；參與果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。果醋制作的原理：當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰�，再將乙醛變�(yōu)榇姿帷?/span>

Ⅰ.（1）欲篩選出能降解豆油的菌株，培養(yǎng)基中應(yīng)只含有豆油而無(wú)其它碳源，不能降解豆油的細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生存，從功能上講，這類培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置；為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過(guò)高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋處理。

（3）為了排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，需設(shè)置接種等量無(wú)菌水的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

（3）由于脂肪遇蘇丹Ⅲ或者蘇丹Ⅳ試劑會(huì)出現(xiàn)橘黃色或者紅色，所以為了篩選出菌株，可將適量的蘇丹Ⅳ試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是出現(xiàn)透明圈、不出現(xiàn)橘黃色或紅色圈，則說(shuō)明此種菌能夠分泌脂肪酶。

（4）分離純化菌種時(shí)，需采用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，使聚集在一起的細(xì)菌細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便純化菌種。純化后的菌種應(yīng)該置于冰箱中保存。

Ⅱ.（1）分析流程圖可知，糖化階段就是淀粉在淀粉酶以及麥芽糖酶的作用下水解產(chǎn)生葡萄糖，由于在最適溫度條件下酶的活性最強(qiáng)，因此在糖化階段添加酶制劑需要控制反應(yīng)溫度。

（2）酵母菌屬于兼性厭氧型微生物，即在有氧呼吸的條件下能夠大量繁殖，在無(wú)氧呼吸條件下無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精。因此在酒精發(fā)酵階段，發(fā)酵罐先通氣，后密閉；通氣的目的是提高酵母菌的數(shù)量，有利于密閉時(shí)獲得更多的酒精產(chǎn)物。

（3）①醋酸菌屬于需氧型細(xì)菌，只有在氧氣充足的時(shí)候能夠大量繁殖并能產(chǎn)生醋酸。據(jù)圖3分析，與顛倒前相比，B層醋酸桿菌密度先快速增長(zhǎng)后趨于穩(wěn)定，變化的主要環(huán)境因素是氧氣、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、PH。

②乳酸含量高是獨(dú)流老醋風(fēng)味獨(dú)特的重要成因，酸發(fā)酵是乳酸菌進(jìn)行的無(wú)氧呼吸，因此發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵缸中顛倒前的B層和顛倒后的A（或不翻動(dòng)，或下）層醋醅有利于乳酸菌繁殖，積累乳酸。

③成熟醋醅中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是發(fā)酵后期營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗等環(huán)境因素的變化，加劇了不同種類乳酸菌的種間競(jìng)爭(zhēng)（或競(jìng)爭(zhēng)），淘汰了部分乳酸菌種類。