Question

【題目】自生固氮菌可不與其它植物共生，能獨(dú)立完成固氮作用，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有廣泛的用途。研究人員欲從土壤中篩選高效的自生固氮菌株進(jìn)行研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過(guò)程中，下列選項(xiàng)不需要的是________(填序號(hào)）。

①酒精燈 ②接種環(huán) ③高壓蒸汽滅菌鍋 ④棉塞

（2）要從土壤樣品中分離出自生固氮菌，在獲得土壤浸出懸液后，可以采用稀釋涂布平板法將菌液涂布于________培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。在下圖所示的四種菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是_______。

（3）稀釋涂布平板法還可用于檢驗(yàn)土壤中自生固氮菌的含量，上圖中用該方法得到的菌落分布圖中，最符合計(jì)數(shù)要求的是圖中的_________。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)是否需要設(shè)置對(duì)照組？__________。為什么？______________________________________。

（4）分別取0.1mL、已稀釋103倍的土壤浸出液，分別涂布到3個(gè)瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到自生固氮菌的菌落平均數(shù)為130。則每g土樣中自生固氮菌為__________。該方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是____________。

Answer 1

【答案】 ② 缺氮 D C 需要 培養(yǎng)基制備不合格會(huì)導(dǎo)致菌落數(shù)増加 1.3×106 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落

【解析】

自生固氮菌是指在土壤中能夠獨(dú)立進(jìn)行固氮的細(xì)菌，可以利用氮?dú)庾鳛榈�源，所以培養(yǎng)基中不需要加氮源。稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液離，聚集在一起的微生物被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而獲得由單細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落。對(duì)微生物進(jìn)行分離、計(jì)數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，往往選取30～300的平板，取至少三個(gè)平板的平均值，每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)。

（1）平板培養(yǎng)基配制的基本流程為：計(jì)算→稱量→溶化（包括瓊脂）→調(diào)節(jié)pH→分裝→滅菌→倒平板→（冷卻后）倒置平板，因此該過(guò)程不需要接種環(huán)接種，故選②。

（2）自生固氮菌是指在土壤中能夠獨(dú)立進(jìn)行固氮的細(xì)菌，所以培養(yǎng)基中不需要加氮源；據(jù)圖分析，前三個(gè)平板是稀釋涂布平板法接種獲得的，第四個(gè)平板是平板劃線法接種獲得的，故選D。

（3）圖中C平板的細(xì)菌的稀釋度大小合適，是最符合計(jì)數(shù)要求的；培養(yǎng)基制備不合格會(huì)導(dǎo)致菌落數(shù)増加，所以用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)需要設(shè)置對(duì)照組，以判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格）。

（4）每g土樣中自生固氮菌數(shù)=130×103÷0.1=1.3×106個(gè)。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以該方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。