Question

12．為了調(diào)查某市自來水水源地的水質(zhì)情況，某研究小組對該地自來水水樣中的大腸桿菌進(jìn)行了測定，請回答下列問題：
（1）該小組采用平板劃線法分離提純水樣中的細(xì)菌，劃線時(shí)在培養(yǎng)基上共畫了4個(gè)區(qū)域，則需要
5次灼燒接種環(huán)．在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做的目的是將聚集的菌體逐步稀釋以獲得單個(gè)菌落．
（2）如果是用試管培養(yǎng)微生物，在培養(yǎng)基凝固前要擱置斜面，其目的是擴(kuò)大接種面積．接種時(shí)需在酒精燈火焰旁操作的原因是：為避免周圍環(huán)境中微生物的污染．
（3）檢測自來水中大腸桿菌，若其中加入蛋白胨，蛋白胨能提供的主要營養(yǎng)有碳源、氮源和維生素．該研究小組在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，為防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而遺漏菌落數(shù)，應(yīng)培養(yǎng)至菌落數(shù)目穩(wěn)定（必須說出數(shù)目，菌落穩(wěn)定不給分）時(shí)，再計(jì)數(shù)．
（4）若用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板進(jìn)行培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．
將1ml自來水稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1ml稀釋液經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為42、43、44，據(jù)此可得出每升溶液中大腸桿菌活菌數(shù)為4.3×10⁷個(gè)/L．
（5）若要測定培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，也可在顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、劃線分離操作中的有關(guān)問題：
①在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)．

	第一次灼燒	每次劃線之前灼燒	劃線結(jié)束灼燒
目的	避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基	殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種	殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染或感染操作者

②在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種．
③在進(jìn)行第二次以及其后的劃線操作時(shí)'要從上一次劃線的末端開始劃線．每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落．
3、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

解答 解：（1）采用平板劃線法純化微生物時(shí)，每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，劃線結(jié)束后還需灼燒接種環(huán)，若劃線時(shí)在培養(yǎng)基上共畫了4個(gè)區(qū)域，則需要5次灼燒接種環(huán)；每次劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，這樣可以將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面．
（2）如果是用試管培養(yǎng)微生物，在培養(yǎng)基凝固前要擱置斜面，其目的是擴(kuò)大接種面積．接種時(shí)需在酒精燈火焰旁操作，這是為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染．
（3）培養(yǎng)基中加入的蛋白胨能提供的主要營養(yǎng)有碳源、氮源和維生素．該研究小組在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，為防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而遺漏菌落數(shù)，應(yīng)培養(yǎng)至菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，再計(jì)數(shù)．
（4）若用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板進(jìn)行培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．
將1ml自來水稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1ml稀釋液經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為42、43、44，據(jù)此可得出每升溶液中大腸桿菌活菌數(shù)為$\frac{42+43+44}{3}$×100×$\frac{1}{0.1}$×1000=4.3×10⁷個(gè)/L．
（5）若要測定培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，也可在顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)．
故答案為：
（1）5    將聚集的菌體逐步稀釋以獲得單個(gè)菌落
（2）擴(kuò)大接種面積    為避免周圍環(huán)境中微生物的污染
（3）碳源、氮源和維生素         菌落數(shù)目穩(wěn)定（必須說出數(shù)目，菌落穩(wěn)定不給分）
（4）檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格       4.3×10⁷個(gè)/L
（5）血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

點(diǎn)評 本題主要考查培養(yǎng)基的制作和微生物的接種方法，意在強(qiáng)化學(xué)生對實(shí)驗(yàn)室的微生物的培養(yǎng)的相關(guān)知識的理解與掌握．