Question

4．“今又生”是我國為數(shù)不多的首創(chuàng)基因治療藥物之一，其本質(zhì)是利用腺病毒和人P⁵³基因（抑癌基因）拼裝得到的重組病毒．人的P⁵³蛋白可對癌變前的DNA損傷進(jìn)行修復(fù)，使其恢復(fù)正常，或誘導(dǎo)其進(jìn)入休眠狀態(tài)或細(xì)胞凋亡，阻止細(xì)胞癌變．“今又生”的載體采用第一代人5型腺病毒，其致病力很弱，其基因不整合到宿主細(xì)胞的基因組中，無遺傳毒性；載體經(jīng)基因工程改造后，只對細(xì)胞實(shí)施一次感染，不能復(fù)制，不會污染．
請回答下列問題：
（1）在“今又生”的生產(chǎn)中，為了獲得更高的安全性能，在載體一般應(yīng)具備的條件中，科學(xué)家選擇性地放棄了一般載體都應(yīng)具有的復(fù)制原點(diǎn)．檢測P⁵³基因的表達(dá)產(chǎn)物，可以采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（2）如果要大量擴(kuò)增P⁵³基因，一般采用PCR技術(shù)，該技術(shù)中需使用的一種特殊的酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶．與體內(nèi)DNA復(fù)制相比較，PCR反應(yīng)要在緩沖溶液中才能進(jìn)行，并且要嚴(yán)格控制溫度條件．
（3）如果要獲得胚胎干細(xì)胞進(jìn)行研究，則胚胎干細(xì)胞可來源于囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，或胎兒的原始性腺；在培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞充滿培養(yǎng)皿底部后停止分裂，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制．如果想繼續(xù)培養(yǎng)則是需要重新用胰蛋白酶處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）根據(jù)題干信息“載體經(jīng)基因工程改造后，只對細(xì)胞實(shí)施一次感染，不能復(fù)制”可知，在“今又生”的生產(chǎn)中，為了獲得更高的安全性能，科學(xué)家選擇性地放棄了具有復(fù)制原點(diǎn)的載體．檢測目的基因是否表達(dá)產(chǎn)生蛋白質(zhì)可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（2）PCR技術(shù)是在較高溫度下進(jìn)行的，因此該技術(shù)中需使用熱穩(wěn)定DNA聚合酶；PCR擴(kuò)增目的基因的過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．因此，與體內(nèi)DNA復(fù)制相比較，PCR反應(yīng)要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行，并且要嚴(yán)格控制溫度等條件．
（3）胚胎干細(xì)胞來源于早期胚胎（囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）或原始性腺；在培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞充滿培養(yǎng)皿底部后停止分裂，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制．如果想繼續(xù)培養(yǎng)則是需要重新用胰蛋白酶處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)．
故答案為：
（1）復(fù)制原點(diǎn)        抗原-抗體雜交
（2）熱穩(wěn)定DNA聚合酶        緩沖溶液      溫度
（3）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)       接觸抑制       胰蛋白酶

點(diǎn)評 本題考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識記PCR技術(shù)的原理、條件及過程；識記胚胎干細(xì)胞的來源及特點(diǎn)；識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．