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第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細(xì)胞（ES），在培養(yǎng)基中擴(kuò)增。這些細(xì)胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。

第二步：構(gòu)建基因表達(dá)載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對(duì)，所以能像“準(zhǔn)星”一樣， 將表達(dá)載體準(zhǔn)確地帶到靶基因的位置。

第三步：將表達(dá)載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細(xì)胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干細(xì)胞增殖、篩選。

請(qǐng)根據(jù)上述資料，回答下列問(wèn)題：

（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞前，應(yīng)首先完成                 。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細(xì)胞通常是             ；若用大腸桿菌儲(chǔ)存目的基因，則需先將其處理為             細(xì)胞。

（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是             。

（4）獲得的小鼠，通過(guò)有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因             。

（1）表達(dá)載體的構(gòu)建

（2）受精卵   感受態(tài)

（3）作為標(biāo)志基因，便于篩選

（4）否

練習(xí)冊(cè)系列答案
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科目：高中生物 來(lái)源：2010～2011學(xué)年吉林省吉林一中高二下學(xué)期第一次月考生物試卷 題型：綜合題

基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來(lái)的一門新興技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA重組原理，用設(shè)計(jì)好的DNA片段替代動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的。在后基因組時(shí)代，研究的重點(diǎn)是利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或基因敲除的動(dòng)物研究基因的功能，運(yùn)用基因重組進(jìn)行基因敲除依然是構(gòu)建基因敲除動(dòng)物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）在把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞前，應(yīng)選擇一個(gè)合適的　　　　　　與之結(jié)合，在這一過(guò)程中所需要的工具酶是限制性內(nèi)切酶和　　　　　　      　。
（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則一般是通過(guò)病毒感染或顯微注射技術(shù)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，選擇的受體細(xì)胞應(yīng)該是                  。
（3）在此類基因操作中，通�？梢杂盟傅陌l(fā)光蛋白作為標(biāo)記物。水母發(fā)光蛋白有發(fā)光環(huán)，能在一定條件下發(fā)出熒光，現(xiàn)已將這種蛋白質(zhì)的基因作為生物轉(zhuǎn)基因的標(biāo)記，在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，這種蛋白質(zhì)的作用是（   ）

A．促使目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中B．促使目的基因在寄主細(xì)胞中復(fù)制
C．使目的基因的轉(zhuǎn)移容易被檢測(cè)出來(lái)D．使目的基因容易表達(dá)成功
（4）按上述操作獲得的轉(zhuǎn)基因小鼠是雜合子，如果想獲得一個(gè)目的基因純合的個(gè)體，以研究該種動(dòng)物體內(nèi)靶基因的功能，應(yīng)該如何進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)？                                  
                                                                                 

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科目：高中生物 來(lái)源：湖南省長(zhǎng)郡中學(xué)2009—2010學(xué)年下學(xué)期高二學(xué)業(yè)水平模擬考試（理綜）生物部分 題型：綜合題

（15分）基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來(lái)的一門新興技術(shù)�！盎蚯贸�(xì)胞”構(gòu)建過(guò)程如下：
第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細(xì)胞（ES），在培養(yǎng)基中擴(kuò)增。這些細(xì)胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。
第二步：構(gòu)建基因表達(dá)載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對(duì)，所以能像“準(zhǔn)星”一樣，將表達(dá)載體準(zhǔn)確地帶到靶基因的位置。
第三步：將表達(dá)載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細(xì)胞的基因改造。
第四步：基因改造后的胚胎干細(xì)胞增殖、篩選。
請(qǐng)根據(jù)上述資料，回答下列問(wèn)題：
（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞前，應(yīng)首先完成                。
（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細(xì)胞通常是            ；若用大腸桿菌儲(chǔ)存目的基因，則需先將其處理為            細(xì)胞。
（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是            。
（4）獲得的小鼠，通過(guò)有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因            。

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科目：高中生物 來(lái)源：湖南省2009—2010學(xué)年下學(xué)期高二學(xué)業(yè)水平模擬考試（理綜）生物部分 題型：綜合題

（15分）基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來(lái)的一門新興技術(shù)。“基因敲除細(xì)胞”構(gòu)建過(guò)程如下：

第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細(xì)胞（ES），在培養(yǎng)基中擴(kuò)增。這些細(xì)胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。

第二步：構(gòu)建基因表達(dá)載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對(duì)，所以能像“準(zhǔn)星”一樣， 將表達(dá)載體準(zhǔn)確地帶到靶基因的位置。

第三步：將表達(dá)載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細(xì)胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干細(xì)胞增殖、篩選。

請(qǐng)根據(jù)上述資料，回答下列問(wèn)題：

（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞前，應(yīng)首先完成                 。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細(xì)胞通常是             ；若用大腸桿菌儲(chǔ)存目的基因，則需先將其處理為             細(xì)胞。

（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是             。

（4）獲得的小鼠，通過(guò)有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因             。

 

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科目：高中生物 來(lái)源：2010～2011學(xué)年湖北省高二下學(xué)期期中考試生物試卷 題型：綜合題

基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來(lái)的一門新興技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA重組原理，用設(shè)計(jì)好的DNA片段替代動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的。在后基因組時(shí)代，研究的重點(diǎn)是利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或基因敲除的動(dòng)物研究基因的功能，運(yùn)用基因重組進(jìn)行基因敲除依然是構(gòu)建基因敲除動(dòng)物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）在把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞前，應(yīng)選擇一個(gè)合適的　　　　　　與之結(jié)合，在這一過(guò)程中所需要的工具酶是限制性內(nèi)切酶和　　　　　　　。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則一般是通過(guò)病毒感染或顯微注射技術(shù)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，選擇的受體細(xì)胞應(yīng)該是         。

（3）在此類基因操作中，通�？梢杂盟傅陌l(fā)光蛋白作為標(biāo)記物。水母發(fā)光蛋白有發(fā)光環(huán)，能在一定條件下發(fā)出熒光，現(xiàn)已將這種蛋白質(zhì)的基因作為生物轉(zhuǎn)基因的標(biāo)記，在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，這種蛋白質(zhì)的作用是（    ）

A．促使目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中        B．促使目的基因在寄主細(xì)胞中復(fù)制

C．使目的基因的轉(zhuǎn)移容易被檢測(cè)出來(lái)    D．使目的基因容易表達(dá)成功

（4）按上述操作獲得的轉(zhuǎn)基因小鼠是雜合子，如果想獲得一個(gè)目的基因純合的個(gè)體，以研究該種動(dòng)物體內(nèi)靶基因的功能，應(yīng)該如何進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)？

 

 

 

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科目：高中生物 來(lái)源：2010～2011學(xué)年吉林省高二下學(xué)期第一次月考生物試卷 題型：綜合題

基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來(lái)的一門新興技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA重組原理，用設(shè)計(jì)好的DNA片段替代動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的。在后基因組時(shí)代，研究的重點(diǎn)是利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或基因敲除的動(dòng)物研究基因的功能，運(yùn)用基因重組進(jìn)行基因敲除依然是構(gòu)建基因敲除動(dòng)物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）在把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞前，應(yīng)選擇一個(gè)合適的　　　　　　與之結(jié)合，在這一過(guò)程中所需要的工具酶是限制性內(nèi)切酶和　　　　　　       　。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則一般是通過(guò)病毒感染或顯微注射技術(shù)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，選擇的受體細(xì)胞應(yīng)該是                   。

（3）在此類基因操作中，通�？梢杂盟傅陌l(fā)光蛋白作為標(biāo)記物。水母發(fā)光蛋白有發(fā)光環(huán)，能在一定條件下發(fā)出熒光，現(xiàn)已將這種蛋白質(zhì)的基因作為生物轉(zhuǎn)基因的標(biāo)記，在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，這種蛋白質(zhì)的作用是（    ）

A．促使目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中     B．促使目的基因在寄主細(xì)胞中復(fù)制

C．使目的基因的轉(zhuǎn)移容易被檢測(cè)出來(lái) D．使目的基因容易表達(dá)成功

（4）按上述操作獲得的轉(zhuǎn)基因小鼠是雜合子，如果想獲得一個(gè)目的基因純合的個(gè)體，以研究該種動(dòng)物體內(nèi)靶基因的功能，應(yīng)該如何進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)？                                  

                                                                                 

 

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