Question

【題目】下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識別位點，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因．

（1）基因工程中使用的限制酶，其特點是 ．
（2）將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質(zhì)粒X﹣1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有 ． （多選）
①X﹣1 ②X﹣2 ③X﹣3 ④X﹣4
（3）若將上圖所示X﹣1、X﹣2、X﹣3、X﹣4四種質(zhì)粒導入大腸桿菌，然后分別涂布在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上．在這兩種培養(yǎng)基上均不能生長的大腸桿菌細胞類型有 ．
（4）如果X﹣1用E1酶切，產(chǎn)生850對堿基和3550對堿基兩種片段：那么質(zhì)粒X﹣2（Tcr基因的長度為1200對堿基）用E2酶切后的片段長度為對堿基．

Answer 1

【答案】
（1）特異性地識別和切割DNA
（2）①②③
（3）無質(zhì)粒細胞和含X﹣3的細胞
（4）4750
【解析】解：（1.）基因工程中使用的限制酶，其特點是特異性地識別和切割DNA．
（2.）因目的基因和質(zhì)粒都是用E1切開且質(zhì)粒上有兩個E1酶切位點，故Apr基因和Tcr基因的黏性末端相同，既可能出現(xiàn)Apr基因和X﹣1連接的產(chǎn)物（X﹣1），也可能出現(xiàn)Tcr基因和X﹣1連接的產(chǎn)物（X﹣2），還可能出現(xiàn)X﹣1兩端連接形成的產(chǎn)物（X﹣3）．
（3.）X﹣1含有Apr基因，該基因表達后對青霉素有抗性，X﹣2含有Tcr基因，該基因表達后對四環(huán)素有抗性，X﹣3不含抗性基因，X﹣4同時含有Apr和Tcr基因，Apr和Tcr基因表達后，對青霉素、四環(huán)素都有抗性．故而在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上不能生長的大腸桿菌中不含X﹣1、X﹣2、X﹣4，即無質(zhì)粒細胞和含X﹣3的細胞．
（4.）用E1酶切X﹣1，產(chǎn)生850對堿基的Apr基因大部分堿基片段和3550對堿基含有E2酶切位點的片段．與Tcr基因形成含有4750個堿基對的X﹣2質(zhì)粒．用E2酶切割質(zhì)粒，由環(huán)狀變?yōu)殒湢�，堿基對數(shù)不變．
【考點精析】認真審題，首先需要了解基因工程的原理及技術(基因工程的原理是利用DNA重組技術)．