Question

利用基因工程技術(shù)，可以使目的基因上特定的堿基發(fā)生替換，從而產(chǎn)生定向變異以獲得性 能更優(yōu)異的蛋白質(zhì)，其基本過(guò)程如圖所示，請(qǐng)回答：
（1）參照PCR技術(shù)，可用

 

方法使質(zhì)粒DNA雙鏈解開(kāi)，甲過(guò)程中加入的一定長(zhǎng)度的核苷酸鏈，其中一個(gè)位置堿基C替代了堿基A，其它的序列與目的基因的一條鏈互補(bǔ)，該多核苷酸鏈在質(zhì)粒DNA復(fù)制中作為

 

．
（2）乙過(guò)程是表示在DNA聚合酶作用下DNA鏈延伸，要形成閉合環(huán)狀DNA分子，還需要

 

酶的參與
（3）丙和丁過(guò)程表示質(zhì)粒分別導(dǎo)入目的細(xì)胞，進(jìn)行增殖并

 

，多代繁殖后，能指導(dǎo)突變蛋白質(zhì)產(chǎn)生的質(zhì)粒占總數(shù)的

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用

專(zhuān)題：

分析：1、PCR技術(shù)：
（1）概念：PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)．
（2）原理：DNA復(fù)制．
（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物．
（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．
（5）過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)．
2、DNA分子的復(fù)制方式：半保留復(fù)制．

解答： 解：（1）PCR反應(yīng)過(guò)程中，通過(guò)高溫破壞DNA分子雙鏈之間的氫鍵，進(jìn)而使DNA雙鏈解開(kāi)，因此可用加熱方法使質(zhì)粒DNA雙鏈解開(kāi)；甲過(guò)程中加人的一定長(zhǎng)度的核苷酸鏈，其中一個(gè)位置堿基C替代了堿基A，其它的序列與目的基因的一條鏈互補(bǔ)，該多核苷酸鏈在質(zhì)粒DNA復(fù)制中作為引物．
（2）連接DNA之間的磷酸二酯鍵需要DNA連接酶的參與．
（3）丙和丁過(guò)程表示質(zhì)粒分別導(dǎo)入目的細(xì)胞，進(jìn)行增殖及表達(dá)（轉(zhuǎn)錄和翻譯）．由圖示可知，乙過(guò)程中形成的閉合環(huán)狀DNA分子中有一條鏈?zhǔn)窃瓉?lái)正常的核苷酸鏈，另一條鏈?zhǔn)前l(fā)生特定的堿基替換的核苷酸鏈，由于DNA復(fù)制是半保留復(fù)制，因此經(jīng)多代繁殖后，能指導(dǎo)突變蛋白質(zhì)產(chǎn)生的質(zhì)粒占總數(shù)的

1

2

．
故答案為：
（1）加熱    引物
（2）DNA連接酶
（3）表達(dá)   

1

2

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖解，考查PCR技術(shù)、DNA分子的復(fù)制，要求考生識(shí)記PCR技術(shù)的概念、原理、過(guò)程及條件；掌握DNA分子復(fù)制的方式，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．