Question

【題目】內(nèi)皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽。內(nèi)皮素主要通過與靶細胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。ETA是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過構(gòu)建表達載體，實現(xiàn)ETA基因在細胞中高效表達，為后期ETA的體外研究奠定基礎(chǔ)。其過程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG）。請分析回答：

（1）完成過程①需要的酶是____________；

（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使__________鍵斷開，形成的黏性末端是__________________。用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是____________________。

（3）過程④中需要 酶，去構(gòu)建重組質(zhì)粒。過程⑥中，要用__________預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界的DNA。

（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是_____________。

（5）人皮膚黑色素細胞上有內(nèi)皮素的特異受體，內(nèi)皮素與黑色素細胞膜上的受體結(jié)合后，會刺激黑色素細胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時可以利用注射ETA達到美白祛斑效果，試解釋原因：______抑制了內(nèi)皮素對黑色素細胞的增殖和黑色素的形成。

Answer 1

【答案】（1）逆轉(zhuǎn)錄酶

（2）磷酸二酯 —AGCT（或—C—GAGCT） 可以使目的基因定向連接到載體上

（3）DNA連接酶 Ca2+（或CaCl2）

（4）檢測ETA基因能否表達及表達量

（5）ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合,減少了內(nèi)皮素與黑色素細胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合

【解析】（1）圖中過程①是逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。

（2）限制酶能識別特定的脫氧核苷酸序列，并在特定脫氧核苷酸之間切斷磷酸二酯鍵；根據(jù)題意可知限制酶XhoⅠ切割DNA形成的黏性末端是—AGCT（或—C

—GAGCT）；用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是可以使目的基因定向連接到載體上（或防止含目的基因的外源DNA片段和質(zhì)粒自身環(huán)化）。

（3）過程④是將目的基因與質(zhì)量連接構(gòu)建基因表達載體，需要DNA連接酶催化；過程⑥中，要用CaCl2預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)的細胞。

（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可以檢測ETA基因能否表達及表達量。

（5）注射的ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合,減少了內(nèi)皮素與黑色素細胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對黑色素細胞的增殖和黑色素的形成，從而達到美容的目的。