Question

4．Bt基因即是蘇云金芽胞桿菌（Badcillus  thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt）基因，因其表達(dá)產(chǎn)物Bt毒蛋白殺蟲(chóng)效果好、安全、高效等優(yōu)點(diǎn)而成為應(yīng)用最為廣泛的轉(zhuǎn)殺蟲(chóng)基因．如圖為培育轉(zhuǎn)Bt基因苗的基本操作過(guò)程．

（1）Bt基因可從構(gòu)建的Bt基因組文庫(kù)中獲取，也可以從其cDNA文庫(kù)中獲取，從前者獲取的基因含有（填“含有”或“不含有”）啟動(dòng)子．若利用PCR技術(shù)從cDNA文庫(kù)中獲取Bt基因（基因序列未知），需根據(jù)Bt蛋白氨基酸序列設(shè)計(jì)引物，引物的序列可以有多種，原因是一種氨基酸可能有多種密碼子，對(duì)應(yīng)生物DNA堿基序列就會(huì)有多種．在PCR體系中需加入其中的全部（填“全部”或“任意1種”或“其中2種”）引物，若Bt基因序列已知，則引物的序列通常為2種．
（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程中，為了方便篩選含有目的基因的細(xì)胞，作為運(yùn)載體的Ti質(zhì)粒應(yīng)含有標(biāo)記基因基因，其中啟動(dòng)子是驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，而能幫助目的基因整合到宿主細(xì)胞染色體上的序列稱為T(mén)-DNA．圖示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）步驟Ⅳ中產(chǎn)生的細(xì)胞團(tuán)稱為愈傷組織，步驟Ⅳ和Ⅴ過(guò)程要注意控制培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的濃度比例，以便獲得幼苗．

Answer 1

分析 1、目的基因：主要指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子．
2、cDNA文庫(kù)和基因組文庫(kù)的比較表：

文庫(kù)類型	cDNA	基因組文庫(kù)
文庫(kù)大小	小	大
基因中啟動(dòng)子	無(wú)	有
基因中內(nèi)含子	無(wú)	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

3、目的基因的檢測(cè)和鑒定：
（1）分子水平上的檢測(cè)  
①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)
（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）Bt毒蛋白基因?qū)儆谀康幕�因，目的基因可從基因組文庫(kù)中獲取，也可從cDNA文庫(kù)中獲取，含有基因中啟動(dòng)子的文庫(kù)是基因組文庫(kù)．若利用PCR技術(shù)從cDNA文庫(kù)中獲取Bt基因，需根據(jù)Bt蛋白氨基酸序列設(shè)計(jì)引物，引物的序列可以有多種，原因是一種氨基酸可能有多種密碼子，對(duì)應(yīng)生物DNA堿基序列就會(huì)有多種．在PCR體系中需加入其中的全部引物，若Bt基因序列已知，則引物的序列通常為2種．
（2）標(biāo)記基因是作用是鑒別和篩選含有目的基因的受體細(xì)胞；啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄；T-DNA的作用是幫助目的基因整合到宿主細(xì)胞染色體上；將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）步驟Ⅳ中產(chǎn)生的細(xì)胞團(tuán)稱為愈傷組織，步驟Ⅳ和Ⅴ過(guò)程要注意控制培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的濃度比例，以便獲得幼苗．
故答案為：
（1）含有   一種氨基酸可能有多種密碼子，對(duì)應(yīng)生物DNA堿基序列就會(huì)有多種   全部   2
（2）標(biāo)記基因（抗性基因）  啟動(dòng)子   T-DNA（可轉(zhuǎn)移DNA）  農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）愈傷組織   生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題