Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，抗HPV的單克隆抗體可以準(zhǔn)確檢測出HPV，從而及時(shí)監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生，以下是以HPV衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體的過程，請據(jù)圖回答下列問題：

（1）單克隆抗體制各過程中涉及的細(xì)胞工程技術(shù)有____________________，單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑，在診斷的應(yīng)用上具有__________________的優(yōu)點(diǎn)。

（2）設(shè)法將B淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，常用的生物誘導(dǎo)因素是__________；雜交瘤細(xì)胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細(xì)胞相比具有的特點(diǎn)是____________________。

（3）雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，對于抗體檢測呈_________性的雜交瘤細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細(xì)胞到3~10個(gè)/mL,每孔加入細(xì)胞稀釋液________mL（填“0．1”“1”或“10”），使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的。

（4）由上述過程生產(chǎn)出的單克隆抗體不能直接用于人體，理由是_______________________。

（5）科學(xué)家從某些無限增殖細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中分離出了無限增殖調(diào)控基因（prG），該基因能激發(fā)動(dòng)物細(xì)胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更多的思路。除本題描述的一種制備單克隆抗體技術(shù)外，請?jiān)俸喴獙懗鲆环N制備單克隆抗體的思路：_________________________。

Answer 1

【答案】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合 準(zhǔn)確、高效、簡易、快速 滅活病毒 染色體數(shù)目加倍 陽 0.1 小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應(yīng) 通過基因工程向漿細(xì)胞中導(dǎo)入prG（或：利用核移植技術(shù)將漿細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的無限增殖細(xì)胞中）

【解析】

單克隆抗體制備流程：

（1）對小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)；（2）得到相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞；（3）將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選；（4）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長（這種雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一的抗體）（5）對上述雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細(xì)胞；（6）最后，將雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體制備過程中涉及的細(xì)胞工程技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合。單克隆抗體最廣泛的用途是用作診斷試劑，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速等優(yōu)點(diǎn)。

（2）細(xì)胞融合的誘導(dǎo)的因素有化學(xué)因素，如聚乙二醇；生物因素，如滅活病毒，物理因素，如電激。因?yàn)殡s交瘤細(xì)胞含有雙親的遺傳物質(zhì)，故雜交瘤細(xì)胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細(xì)胞相比具有的特點(diǎn)是染色體數(shù)目加倍。

（3）對于抗體檢測呈陽性的雜交克隆應(yīng)盡早進(jìn)行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細(xì)胞到3～10個(gè)細(xì)胞/mL，每孔加入細(xì)胞稀釋液0.1mL，使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的。

（4）因?yàn)樾∈笮纬傻目贵w對人體來說是抗原，存在著排異反應(yīng)，故上述過程生產(chǎn)出的單克隆抗體不能直接用于人體。

（5）可以利用基因工程技術(shù)將無限增殖調(diào)控基因（prG）分離出來再導(dǎo)入到漿細(xì)胞中，或者利用細(xì)胞核移植技術(shù)將漿細(xì)胞的細(xì)胞核移入到含有prG基因的細(xì)胞質(zhì)中，獲得重組細(xì)胞，最終獲得單克隆抗體。