Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發(fā)生密切相關，抗HPV的單克隆抗體可以準確檢測出HPV，從而及時監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生，以下是以HPV衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體的過程，請據圖回答下列問題：

（1）單克隆抗體制各過程中涉及的細胞工程技術有____________________，單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑，在診斷的應用上具有__________________的優(yōu)點。

（2）設法將B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合，常用的生物誘導因素是__________；雜交瘤細胞中染色體數目與普通淋巴細胞相比具有的特點是____________________。

（3）雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，對于抗體檢測呈_________性的雜交瘤細胞應進行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細胞到3~10個/mL,每孔加入細胞稀釋液________mL（填“0．1”“1”或“10”），使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)的目的。

（4）由上述過程生產出的單克隆抗體不能直接用于人體，理由是_______________________。

（5）科學家從某些無限增殖細胞的細胞質中分離出了無限增殖調控基因（prG），該基因能激發(fā)動物細胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更多的思路。除本題描述的一種制備單克隆抗體技術外，請再簡要寫出一種制備單克隆抗體的思路：_________________________。

Answer 1

【答案】動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合 準確、高效、簡易、快速 滅活病毒 染色體數目加倍 陽 0.1 小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應 通過基因工程向漿細胞中導入prG（或：利用核移植技術將漿細胞的細胞核移植到去核的無限增殖細胞中）

【解析】

單克隆抗體制備流程：

（1）對小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產生免疫反應；（2）得到相應的B淋巴細胞；（3）將小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選；（4）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜種細胞才能生長（這種雜種細胞的特點是既能迅速大量繁殖又能產生專一的抗體）（5）對上述雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細胞；（6）最后，將雜交瘤細胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內增殖，這樣，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體制備過程中涉及的細胞工程技術有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合。單克隆抗體最廣泛的用途是用作診斷試劑，具有準確、高效、簡易、快速等優(yōu)點。

（2）細胞融合的誘導的因素有化學因素，如聚乙二醇；生物因素，如滅活病毒，物理因素，如電激。因為雜交瘤細胞含有雙親的遺傳物質，故雜交瘤細胞中染色體數目與普通淋巴細胞相比具有的特點是染色體數目加倍。

（3）對于抗體檢測呈陽性的雜交克隆應盡早進行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細胞到3～10個細胞/mL，每孔加入細胞稀釋液0.1mL，使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)的目的。

（4）因為小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應，故上述過程生產出的單克隆抗體不能直接用于人體。

（5）可以利用基因工程技術將無限增殖調控基因（prG）分離出來再導入到漿細胞中，或者利用細胞核移植技術將漿細胞的細胞核移入到含有prG基因的細胞質中，獲得重組細胞，最終獲得單克隆抗體。