Question

［生物-現(xiàn)代生物科技專題］必答題（10分）

Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的_______________________。

（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到_______________________期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。

（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有基因Rag₂的表達(dá)載體�？梢愿鶕�(jù)Rag₂基因的_______________________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PsⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有_______________________酶的酶切位點(diǎn)。

（4）為檢測(cè)Rag₂基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的_______________________，用抗Rag₂蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】（10分）

（1）細(xì)胞核

（2）囊胚

（3）核苷酸序列    HindⅢ和PstⅠ

（4）蛋白質(zhì)

【解析】（1）步驟①是核移植過(guò)程。體細(xì)胞核移植前要除去受體卵母細(xì)胞的細(xì)胞核，原因是若不去掉卵母細(xì)胞的細(xì)胞核，就會(huì)造成細(xì)胞里面就有兩個(gè)細(xì)胞核，使得遺傳物質(zhì)是不穩(wěn)定的。

（2）ES細(xì)胞是由早期胚胎（囊胚）的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出來(lái)的一類細(xì)胞。

（3）步驟③過(guò)程是導(dǎo)入目的基因——Rag2基因于ES細(xì)胞中的基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程。在生物體外可通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其條件是模板DNA、Rag2基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶等，另外根據(jù)題干可知，獲得Rag2目的基因需要用 HindⅢ和PstⅠ兩種限制酶，所以在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點(diǎn)。

（4）檢測(cè)目的基因是否翻譯相應(yīng)蛋白質(zhì)時(shí)，應(yīng)采用抗原—抗體雜交（免疫）法，即提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗體—抗原雜交，看是否有雜交帶。