Question

【題目】回答與枯草桿菌純化和a-淀粉酶固定化過(guò)程有關(guān)的問(wèn)題：

（1）培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：在對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的過(guò)程中，完成加水、裝鍋、加熱排氣、 保溫保壓適當(dāng)時(shí)間后，切斷熱源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，壓力表的讀數(shù)______________， 打開(kāi)排氣閥，旋開(kāi)固定螺栓，開(kāi)蓋，才可以取出滅菌的培養(yǎng)基等物品。待培養(yǎng)基冷卻至______________左右時(shí)倒平板。

（2）枯草桿菌是生產(chǎn)a-淀粉酶的優(yōu)良菌種，為確定合適的稀釋倍數(shù)，小組成員取1mL菌原 液進(jìn)行如圖1所示的操作，在無(wú)菌條件下，用______________取0． 1 mL稀釋后的菌懸液進(jìn)行 圖2中____________所示的操作，接種后的平板在培養(yǎng)時(shí)的放置應(yīng)如圖3______________（選填“a”或“b”）所示。在統(tǒng)計(jì)菌落時(shí)，發(fā)現(xiàn)平板上的平均菌落數(shù)為33個(gè)，則每毫升菌原液中的細(xì)菌數(shù)大約為______________個(gè)。

（3）a-淀粉酶宜采用吸附法進(jìn)行固定化，下列關(guān)于反應(yīng)柱的理解，正確的是______________

A．反應(yīng)物和酶均可自由通過(guò)反應(yīng)柱B．反應(yīng)物和酶均不能通過(guò)反應(yīng)柱

C．反應(yīng)物能通過(guò)反應(yīng)柱，酶不能通過(guò)反應(yīng)柱D．反應(yīng)物不能通過(guò)，酶能通過(guò)

（4）為了確定篩選出的a-淀粉酶的應(yīng)用價(jià)值，還需要進(jìn)一步檢測(cè)固相a-淀粉酶的活性，在該實(shí)驗(yàn)中，親和層析洗脫液中加入KI-I2指示劑后，試管中呈現(xiàn)______________色。相對(duì)于唾液淀粉酶，枯草桿菌產(chǎn)生的a-淀粉酶具有______________特性，從而有利于工業(yè)生產(chǎn)。

Answer 1

【答案】降為零 60°C 移液槍（移液器） 甲 a 3．3×105個(gè) C 紅色 耐高溫

【解析】

1、微生物常見(jiàn)的接種的方法

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

2、固定化酶有物理法和化學(xué)法兩大類：物理方法包括物理吸附法、包埋法等，化學(xué)法包括交聯(lián)法等。缺點(diǎn)：不利于催化一系列的酶促反應(yīng)；優(yōu)點(diǎn)：①既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離；②可以反復(fù)利用。

（1）培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：在對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的過(guò)程中，完成加水、裝鍋、加熱排氣、保溫保壓適當(dāng)時(shí)間后，切斷熱源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，壓力表的壓力降為零，打開(kāi)排氣閥，旋開(kāi)固定螺栓，開(kāi)蓋，才可以取出滅菌的培養(yǎng)基等物品。待培養(yǎng)基冷卻至60℃左右時(shí)倒平板。

（2）為確定合適的稀釋倍數(shù)，小組成員取1mL菌原 液進(jìn)行如圖1所示的操作，在無(wú)菌條件下，用移液槍取0.1 mL稀釋后的菌懸液進(jìn)行，因要對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，故選用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，即圖2中甲所示的操作，接種后的平板在培養(yǎng)時(shí)的應(yīng)該倒放，即如圖3中a所示。由圖1可知，菌原液被稀釋了103倍，在統(tǒng)計(jì)菌落時(shí)，發(fā)現(xiàn)平板上的平均菌落數(shù)為33個(gè)，則每毫升菌原液中的細(xì)菌數(shù)大約為33×10×103=3.3×105個(gè)。

（3）反應(yīng)柱的底端分布著許多小孔的篩板，酶顆粒無(wú)法通過(guò)，反應(yīng)溶液可以自由通過(guò)，故α-淀粉酶宜采用吸附法進(jìn)行固定化時(shí)反應(yīng)物能通過(guò)反應(yīng)柱，酶不能通過(guò)反應(yīng)柱，C正確。

故選C。

（4）酶柱中有α-淀粉酶，淀粉溶液經(jīng)酶柱后的流出液，淀粉被水解成糊精，加人KI-I2溶液后呈紅色。與唾液淀粉酶相比，枯草桿菌產(chǎn)生的α-淀粉酶是適宜溫度在50~70℃，因此具有耐高溫的特點(diǎn)，有利于生產(chǎn)。