Question

4．如圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線．圖中tet^R表示四環(huán)素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三種限制酶．請據(jù)圖回答：
（1）從高表達(dá)人乳鐵蛋白的組織細(xì)胞中提取mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄過程獲得cDNA，用于PCR擴(kuò)增．
（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因．篩選含有重組載體的大腸桿菌，首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行．
（3）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是A（填字母代號）．
A．啟動(dòng)子       B．tet^R        C．復(fù)制原點(diǎn)       D．a(chǎn)mp^R
（4）過程①可采用的操作方法是顯微注射法．進(jìn)行過程②之前，需用相應(yīng)的激素處理代孕牛，使其處于同期發(fā)情狀態(tài)．
（5）對早期胚胎進(jìn)行切割，可獲得多個(gè)新個(gè)體，該種生殖方式是無性生殖（克�。�．
（6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線，包括基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞；過程②需采用胚胎移植技術(shù)．

解答 解：（1）以mRNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉(zhuǎn)錄．
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點(diǎn)，其中限制酶SmaI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，所以獲取目的基因和構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質(zhì)粒后，會(huì)破壞質(zhì)粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行．
（3）啟動(dòng)子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列．
（4）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；進(jìn)行胚胎移植前，需要用相應(yīng)的激素處理代孕牛，使其處于同期發(fā)情狀態(tài)．
（5）來自同一個(gè)胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此胚胎分割可以看做動(dòng)物無性繁殖或克隆的方法之一．
（6）檢測目的基因是否表達(dá)常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄   
（2）HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素　
（3）A
（4）顯微注射   同期發(fā)情　 
（5）無性生殖（克�。�　
（6）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評 本題結(jié)合乳腺生物反應(yīng)器培育過程圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱或采用的技術(shù)，同時(shí)能提取圖中有效信息答題．