Question

14．長期以來，香蕉生產(chǎn)遭受病害的嚴重威脅，制約了其發(fā)展．目前，隨著轉(zhuǎn)基因抗病香蕉基因工程技術(shù)的日趨成熟，為培育抗病香蕉品種開辟了新途徑．轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示，質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四種限制酶切割位點．請回答：

（1）構(gòu)建含抗病基因的PstⅠ表達載體A時，應(yīng)選用EcoRⅠ限制酶，對含抗病基因的DNA和質(zhì)粒進行切割．
（2）培養(yǎng)基中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，應(yīng)使基因表達載體A中含有抗卡那霉素基因，作為標記基因．
（3）能使抗病基因在香蕉細胞中特異性表達的位于基因首端的調(diào)控序列是：A（填字母序號）．
A啟動子   B終止子  C 復(fù)制原點   D標記基因
（4）欲檢測目的基因是否表達成功，可采用的技術(shù)C（填字母序號）．
A．核酸分子雜交      B．基因序列分析    C．抗原-抗體雜交   D．PCR．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中SmaⅠ酶的切割位點位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點．所以要活動重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進行切割．①表示脫分化過程、②表示再分化過程．

解答 解：（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，但限制酶SmaⅠ的切割位點位于抗病基因上，對SmaⅠ位點進行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ對圖中對應(yīng)的位點進行切割．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)選用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA分子．
（2）欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時含有抗卡那霉素基因，作為標記基因．
（3）啟動子和終止子能啟動目的基因的轉(zhuǎn)錄與終止，是使抗病基因在香蕉細胞中特異性表達的調(diào)控序列．
（4）檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用DNA分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，采用分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否表達成功產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)，采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）PstⅠEcoRⅠ質(zhì)粒
（2）抗卡那霉素基因
（3）A 
（4）C

點評 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程圖，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的具體操作步驟；識記植物組織培養(yǎng)的原理和過程，能準確判斷圖中各過程的名稱，再結(jié)合所學(xué)的知識準確答題．