Question

【題目】藍白斑篩選是基因工程中篩選重組目的基因常用的一種方法，表現(xiàn)為培養(yǎng)基上出現(xiàn)藍白顏色的菌落，可以通過顏色為依據(jù)直接篩選重組菌。用于篩選的菌為β-半乳糖苷酶缺陷型菌株，這種宿主菌中編碼β-半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于藍白斑篩選的質(zhì)粒載體一般含有抗性基因和將宿主菌β-半乳糖苷酶缺失部分補全的序列，在這段序列中還含有多個限制性酶切位點，便于插入目的基因。β-半乳糖苷酶能夠作用于一種無色化合物X-gal，使其變成藍色物質(zhì)。回答下列問題：

（1）玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器材利用__________方法滅菌。

（2）培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到____℃左右時，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要將平板倒扣，原因是________________。

（3）為防止雜菌污染，培養(yǎng)基中要添加______。藍白斑篩選能成功，是因為培養(yǎng)基中添加了_________。

（4）最終培養(yǎng)基出現(xiàn)的白色的菌落是（__）

A.目的基因和載體結(jié)合 B.只含目的基因 C.只含載體

（5）需要長期保存該菌種，可采用的方法是_______。

Answer 1

【答案】干熱滅菌 50 防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染 抗生素 X-gal A 甘油管藏法

【解析】

倒平板的溫度一般50℃左右適宜，溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固；
平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

（1）玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器材利用干熱滅菌方法滅菌。

（2）培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要將平板倒扣，原因是防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。

（3）為防止雜菌污染，培養(yǎng)基中要添加抗生素。β-半乳糖苷酶能夠作用于一種無色化合物X-gal，使其變成藍色物質(zhì)，藍白斑篩選能成功，是因為培養(yǎng)基中添加了X-gal。

（4）由于用于藍白斑篩選的質(zhì)粒載體一般含有抗性基因和將宿主菌β-半乳糖苷酶缺失部分補全的序列，因此最終培養(yǎng)基出現(xiàn)的白色的菌落是目的基因和載體結(jié)合的菌落，故選A。

（5）需要長期保存該菌種，可采用的方法是甘油管藏法。