Question

【題目】如圖為某種質(zhì)粒，小箭頭所指為限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ的酶切位點，ampR為氨芐青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端包括EcoRⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點。請根據(jù)圖

回答下列問題。

（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有_________、_________、_________三種。將此三種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的細菌A接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的細菌A所含有的連接產(chǎn)物是_________；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長繁殖的細菌A所含有的連接產(chǎn)物是_________。

（2）假設(shè)人的生長激素基因，與上述質(zhì)粒構(gòu)建表達載體后導入細菌B（本身不含有氨芐青霉素和四環(huán)素抗性質(zhì)粒），然后接種在一個只含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，得到如圖a所示的結(jié)果（圓點表示菌落），該結(jié)果說明能夠生長的細菌中已經(jīng)導入了_________，反之則沒有導入；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基a上，使絨布表面沾上菌落，然后將絨布按到只含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b所示結(jié)果（空心圓圈表示與圖a中培養(yǎng)基上對照沒有菌落的位置）。與圖b圓圈相對應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型是_________，這些菌落則是導入了_________的工程菌。

Answer 1

【答案】 目的基因和質(zhì)粒連接物 質(zhì)粒和質(zhì)粒連接物 目的基因和目的基因連接物 質(zhì)粒和質(zhì)粒連接物 目的基因和質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒和質(zhì)粒連接物 重組質(zhì)�；蚱胀ㄙ|(zhì)粒 抗氨芐青霉素而不抗四環(huán)素 重組質(zhì)粒

【解析】試題分析：根據(jù)題干信息和圖像分析可知，圖中質(zhì)粒上含有限制性內(nèi)切酶EcoRI酶切位點、氨芐青霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因、啟動子、終止子、復制原點，其中兩個抗性基因一般用于篩選重組質(zhì)粒，并且當限制酶切割質(zhì)粒時，四環(huán)素抗性基因被破壞，即失活，因此在篩選時應(yīng)選擇含有氨芐青霉素抗性基因而四環(huán)素抗性基因被破壞的重組質(zhì)粒。

（1）用EcoRI酶切出的目的基因和質(zhì)粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可出現(xiàn)3種連接結(jié)果，即目的基因自身連接形成的連接物，質(zhì)粒自身連接形成的連接物和重組質(zhì)粒（目的基因和質(zhì)粒連接物）。將此三種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的細菌A接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，由于構(gòu)建基因表達載體時，四環(huán)素抗性基因被破壞，因此能生長的細菌A所含有的連接產(chǎn)物是質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接物；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，由于青霉素抗性基因沒有被破壞，因此能生長的細菌A所含有的連接產(chǎn)物是目的基因與質(zhì)粒的連接物、質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接物。

（2）由于質(zhì)粒上有2個標記基因，但抗四環(huán)素基因被插入的基因破壞掉，因此剩下的是抗氨芐青霉素抗性基因，如果在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生長，說明已經(jīng)導入了重組質(zhì)�；蚱胀ㄙ|(zhì)粒，因為普通質(zhì)粒和重組質(zhì)粒都含有抗氨芐青霉素的基因。與圖b空圈相對應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型是抗氨芐青霉素但不抗四環(huán)素，說明這些細菌中導入了重組質(zhì)粒。