Question

【題目】自生固氮菌可不與其它植物共生，能獨(dú)立完成固氮作用，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有廣泛的用途。研究人員從土壤中篩選高效的自生固氮菌株，并對(duì)其固氮能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過(guò)程中，下列選項(xiàng)不需要的是________（填序號(hào)）

①酒精燈 ②接種環(huán) ③高壓蒸汽滅菌鍋 ④棉塞

（2）要從土壤樣品中分離出自生固氮菌，在獲得土壤浸出懸液后，可以采用稀釋涂布平板法將菌液涂布于________培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。

（3）在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌液量不宜過(guò)多的原因是_________________________________。

（4）涂布培養(yǎng)四天后，可通過(guò)觀(guān)察________的形態(tài)特征來(lái)統(tǒng)計(jì)土壤中自身固氮菌的種類(lèi)。

（5）為了進(jìn)一步篩選高效固氮菌，研究人員將上述獲得的等量的四種固氮菌分別接種到等量的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)相同時(shí)間后，對(duì)固氮菌進(jìn)行計(jì)數(shù)并測(cè)定培養(yǎng)液中的含氮量，結(jié)果如下表：

甲菌乙菌丙菌丁菌

菌量（個(gè)/mL）2.1×1052.5×1051.8×1052.0×105

含氮量（K）3.324.385.345.32

①培養(yǎng)過(guò)程中需不斷振蕩的目的是__________________________________________________。

②可以采用________方法對(duì)固氮菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，假設(shè)計(jì)數(shù)室長(zhǎng)和寬均為1mm，深0.1 mm，每個(gè)小方格中平均有7個(gè)固氮菌，則10mL培養(yǎng)液中有固氮菌的數(shù)量為________個(gè)；如果小方格中固氮菌的數(shù)量太多，無(wú)法數(shù)清，則應(yīng)________。

③由上述結(jié)果可知，________菌的固氮效率最高。

Answer 1

【答案】

（1）②

（2）缺氮

（3）培養(yǎng)基表面的菌懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果 （4）菌落

（5）①讓固氮菌與培養(yǎng)液充分接觸 ②抽樣檢測(cè) 2.8×108 對(duì)培養(yǎng)液稀釋后計(jì)數(shù) ③丙

【解析】

試題分析：

（1）平板培養(yǎng)基配制的基本流程為：計(jì)算→稱(chēng)量→溶化（包括瓊脂）→調(diào)節(jié)PH→滅菌（將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋）→倒平板（在酒精燈火焰旁進(jìn)行），上述過(guò)程不需要接種環(huán)，即②。

（2）自生固氮菌是指在土壤中能夠獨(dú)立進(jìn)行固氮的細(xì)菌，可在缺氮培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，因此，若要從土壤樣品中分離出自生固氮菌，在獲得土壤浸出懸液后，可以采用稀釋涂布平板法將菌液涂布于缺氮培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。

（3）在涂布平板時(shí)，若滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液過(guò)多，則會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果。

（4）不同的微生物表現(xiàn)出不同的菌落形態(tài)特征，所以涂布培養(yǎng)四天后，可通過(guò)觀(guān)察菌落的形態(tài)特征來(lái)統(tǒng)計(jì)土壤中自身固氮菌的種類(lèi)。

（5）①培養(yǎng)過(guò)程中需不斷振蕩的目的是讓固氮菌與培養(yǎng)液充分接觸。

②對(duì)固氮菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，可采用抽樣檢測(cè)的方法。假設(shè)計(jì)數(shù)室長(zhǎng)和寬均為1mm，深0.1 mm，每個(gè)小方格中平均有7個(gè)固氮菌，則10mL培養(yǎng)液中有固氮菌的數(shù)量為1mm×1mm×0.1 mm×7×10mL×400×10000 =2.8×108個(gè)；如果小方格中固氮菌的數(shù)量太多，無(wú)法數(shù)清，則應(yīng)對(duì)培養(yǎng)液稀釋后計(jì)數(shù)。

③表中信息顯示：丙菌培養(yǎng)液中的含氮量最高，說(shuō)明丙菌的固氮效率最高。