Question

【題目】尿素［CO(NH2)2］是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。但尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收，只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某生物兵趣小組欲分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，

設(shè)計了如下實驗流程：

土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布培養(yǎng)→計數(shù)與鑒定

請回答相關(guān)問題：

（1）涂布培養(yǎng)前需要梯度稀釋，其目的是____，如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在____之間的平板，則說明稀釋操作比較成功。

（2）選擇培養(yǎng)過程能夠“濃縮”尿素分解菌是因為其培養(yǎng)基____

（3）取1g土壤，按下圖稀釋后，在三個平板上分別接入0.1ml稀釋液后，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別是52, 50和48。據(jù)此可計算出每克土樣中的活菌數(shù)為___，該數(shù)值與活菌的實際數(shù)目相比____（偏高／偏低），原因是：____

（4）在培養(yǎng)基上滴加酚紅指示劑可以鑒定其上細(xì)菌能否分解尿素，其原理是____

Answer 1

【答案】將聚在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基上形成單個菌落（或培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌） 30—300 以尿素作為唯一氮源 5.0107個 偏低 因為兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 分解尿素的細(xì)菌能(合成脲酶)將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基堿性增強，酚酞指示劑變紅

【解析】

統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計數(shù)法
①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。
（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）
①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。
③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。

（1）涂布培養(yǎng)前需要梯度稀釋，其目的是將聚在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基上形成單個菌落；如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30-300之間的平板，則說明稀釋操作比較成功。
（2）選擇培養(yǎng)過程能夠“濃縮”尿素分解菌是因為其培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，只有能夠分解尿素的微生物可以在此培養(yǎng)基上生長，而其它不能以尿素作為氮源的則會因為缺少氮源而不能生長。
（3）取1g土壤，按如圖稀釋后，在三個平板上分別接入0.1ml稀釋液后，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別是52，50和48。據(jù)此可計算出每克土樣中的活菌數(shù)為×100=5.0×107個；由于兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此該數(shù)值與活菌的實際數(shù)目相比偏低。
（4）鑒定尿素分解菌的原理是分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基堿性增強，酚酞指示劑變紅。