Question

【題目】淀粉樣蛋白前體（APP）是細(xì)胞膜上的跨膜蛋白，在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異常。實(shí)驗(yàn)人員采用RNA干擾技術(shù)，靶向干擾鼻咽癌細(xì)胞中APP表達(dá)的方法來(lái)研究APP的生物學(xué)功能。

（1）培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常在培養(yǎng)液中加入適量的___以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，待細(xì)胞貼壁長(zhǎng)成單層后用______消化處理，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

（2）將上述鼻咽癌細(xì)胞分成三組，分別用人工脂雙層包裹的siAPP-A、siAPP-B、NC的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞。其中siAPP-A、siAPP-B是不同的靶向干擾APP表達(dá)的RNA序列，NC是無(wú)義RNA序列，由這三種RNA的功能推測(cè)它們的___________一定不同；利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染讓外源RNA進(jìn)入癌細(xì)胞依據(jù)的是____ 。

（3）部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖：

①由圖1結(jié)果可知，細(xì)胞中β-actin蛋白的表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定，在實(shí)驗(yàn)中可作為________，　以排除細(xì)胞培養(yǎng)操作、點(diǎn)樣量、檢測(cè)方法等無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)　果支持靶向干擾APP表達(dá)成功，判斷依據(jù)是___________。

②分析圖2結(jié)果可知，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞周期比對(duì)照組，說(shuō)明干擾APP的表達(dá)可以__________________ 。

（4）實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，干擾APP表達(dá)后鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力顯著降低，作出此判斷的依據(jù)是___________。

Answer 1

【答案】動(dòng)物血清 胰蛋白酶（膠原蛋白酶） 核糖核苷酸序列（堿基序列） 膜的流動(dòng)性（細(xì)胞膜的流動(dòng)性） 參照（標(biāo)準(zhǔn)或?qū)φ眨?/span> siAPP-A、siAPP-B組APP表達(dá)量低于NC組 長(zhǎng)抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖 干擾APP后鼻咽癌細(xì)胞細(xì)胞膜上糖蛋白增多，細(xì)胞黏著性增強(qiáng)

【解析】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件:
(1)無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境:(1)消毒、滅菌;(2)添加一定量的抗生素;(3)定期更換培養(yǎng)液,以清除代謝廢物。

(2)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等,還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。

(3)溫度和PH。

(4)氣體環(huán)境:空氣(細(xì)胞代謝必需的)和5%的的作用是維持培養(yǎng)液的。

(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常在培養(yǎng)液中加人適量的動(dòng)物血清，以提供血清中細(xì)胞生活必需的一些未知成分,補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì);由于細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)分泌膠原蛋白等胞外蛋白,使細(xì)胞之間相互黏連,甚至細(xì)胞與培養(yǎng)瓶的內(nèi)壁黏連起來(lái),貼壁生長(zhǎng),待細(xì)胞貼壁長(zhǎng)成單層后就要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理,分解細(xì)胞外的膠原蛋白,使細(xì)胞相互分離,同時(shí)使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫落下來(lái)，分散成單個(gè)細(xì)胞后,再分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

(2)siAPP-A、siAPP-B和NC是不同的RNA,功能不同，因此這三種RNA中的核糖核苷酸序列(堿基序列)不同;分別用含有siAPP-A、siAPP–B、NC的脂質(zhì)體(人工脂雙層)轉(zhuǎn)染癌細(xì)胞時(shí)，通過(guò)膜的流動(dòng)性,讓外源RNA進(jìn)人癌細(xì)胞內(nèi)。

(3)①由圖甲結(jié)果可知,分別轉(zhuǎn)人siAPP-A、siAPP-B和NC的細(xì)胞中β-actin蛋白的表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定,在實(shí)驗(yàn)中可作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)照,排除了細(xì)胞培養(yǎng)操作點(diǎn)樣量檢測(cè)方法等無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響;轉(zhuǎn)入siAPP-A和siAPP--B的實(shí)驗(yàn)組中的細(xì)胞內(nèi)APP表達(dá)量比轉(zhuǎn)人無(wú)義RNA作為對(duì)照的NC組少,但是不影響β-actin蛋白的表達(dá)，說(shuō)明轉(zhuǎn)人的siAPP-A和siAPP-B能靶向性干擾癌細(xì)胞中APP的表達(dá)。

②由圖乙結(jié)果可知,轉(zhuǎn)人siAPP-A和siAPP-B的實(shí)驗(yàn)組中的細(xì)胞比作為對(duì)照的NC組細(xì)胞數(shù)量少,說(shuō)明癌細(xì)胞的增殖受到了一定程度的抑制,相同時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的分裂次數(shù)減少,細(xì)胞周期比對(duì)照組長(zhǎng)。

(4)細(xì)胞膜表面的糖蛋白減少,癌細(xì)胞之間的黏著性下降是癌細(xì)胞容易發(fā)生擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移的重要原因。干擾APP表達(dá)后鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力顯著降低,推測(cè)可能的原因是于擾APP表達(dá)后,鼻咽癌細(xì)胞細(xì)胞膜上糖蛋白增多,細(xì)胞黏著性增強(qiáng),癌細(xì)胞不易發(fā)生擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。