Question

【題目】2016年5月13日，美國國家衛(wèi)生院科學(xué)家發(fā)表報告，他們在艾滋病病毒上發(fā)現(xiàn)一種由8個氨基酸組成的融合肽，它是病毒入侵細(xì)胞的關(guān)鍵性物質(zhì)。這一發(fā)現(xiàn)為艾滋病的預(yù)防和治療開辟了一條新途徑。

欲將融合肽設(shè)計(jì)為疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防，可能需要改造其部分結(jié)構(gòu)。

①一般流程是：預(yù)期新型融合肽的功能→設(shè)計(jì)新型融合肽結(jié)構(gòu)→推測________________→找到對應(yīng)的脫氧核苷酸序列。然后用___________（答一種儀器）合成出目的基因。要獲得大量的目的基因，需要用___________擴(kuò)增。該技術(shù)的前提是要有______________序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。

②欲用牛乳腺生物反應(yīng)器大量生產(chǎn)新型融合肽，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，需要加入____________啟動子，通常選用______________作為受體細(xì)胞。

欲大量生產(chǎn)融合肽抗體用于免疫治療，可將融合肽反復(fù)多次注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟提取_________細(xì)胞，將其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，并在特定的培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細(xì)胞，再通過_________，篩選出能產(chǎn)生融合肽抗體的雜交瘤細(xì)胞，在小鼠腹水或體外擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得大量融合肽抗體。

Answer 1

【答案】 應(yīng)有氨基酸序列 DNA合成儀 PCR 一段已知目的基因的核苷酸 牛乳腺蛋白基因 受精卵 B（B淋巴） （多次）克隆化培養(yǎng)和（專一）抗體（陽性）檢測

【解析】分析：蛋白質(zhì)工程的一般流程是：預(yù)期合成的新蛋白質(zhì)的功能→設(shè)計(jì)新蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)→推測新蛋白質(zhì)應(yīng)有的氨基酸序列→找到對應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成目的基因→導(dǎo)入目的基因到受體細(xì)胞→得到預(yù)期的蛋白質(zhì)。為了得到大量的目的基因，需要PCR技術(shù)擴(kuò)增，該技術(shù)完成特別需要一段已知序列的引物，另外還需要具有熱穩(wěn)定的DNA聚合酶和相關(guān)的原料。為了獲得大量的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物，一是培育大量轉(zhuǎn)基因的牛乳腺生物反應(yīng)器，二是應(yīng)用單克隆抗體制備技術(shù)實(shí)現(xiàn)。

根據(jù)蛋白質(zhì)工程的一般流程分析可知：預(yù)期新型融合肽的功能→設(shè)計(jì)新型融合肽結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有氨基酸序列→找到對應(yīng)的脫氧核苷酸序列。如果目的基因中核苷酸序列已知且數(shù)量較少，可以用DNA合成儀合成出目的基因。要獲得大量的目的基因，需要用PCR技術(shù)擴(kuò)增。該技術(shù)的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。

為了在轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中提取到新型融合肽，需要將新合成的目的基因之前加入牛乳腺蛋白基因的啟動子，確保新型融合肽在乳腺細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并隨乳汁分泌出來。這一過程的受體細(xì)胞通常選受精卵。

欲大量生產(chǎn)融合肽抗體用于免疫治療，可將融合肽反復(fù)多次注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟提取B淋巴細(xì)胞，將其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，并在特定的培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細(xì)胞，再通過多次克隆化培養(yǎng)和專一抗體陽性檢測，篩選出能產(chǎn)生融合肽抗體的雜交瘤細(xì)胞，在小鼠腹水或體外擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得大量融合肽抗體。