Question

8．將動物致病菌的抗原基因?qū)�入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉(zhuǎn)基因馬鈴薯可使動物獲得免疫力．以下是與植物疫苗制備過程相關(guān)的圖和表．

表2　幾種限制酶識別序列及切割位點表

限制酶	AluⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ	SmaⅠ
切割位點	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

請根據(jù)以上圖表回答下列問題．
（1）在采用常規(guī)PCR方法擴增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點是耐高溫．
（2）圖1步驟③所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？否
（3）為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖1步驟⑥轉(zhuǎn)基因所用的細(xì)菌B通常為農(nóng)桿菌．
（4）對符合設(shè)計要求的重組質(zhì)粒T進行酶切．假設(shè)所用的酶均可將識別位點完全切開，請根據(jù)圖1中標(biāo)示的酶切位點和表2所列的識別序列，對以下酶切結(jié)果做出判斷．
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到2種DNA片段．
②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切得到1種DNA片段．

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運載體：常用的運載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．
2、細(xì)胞中DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較：

		細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制	體外DNA擴增（PCR）
不同點	解旋	在解旋酶作用下邊解旋邊復(fù)制	80～100℃高溫解旋，雙鏈完全分開
	酶	DNA解旋酶、DNA聚合酶	TaqDNA聚合酶
	引物	RNA	DNA、RNA
	溫度	體內(nèi)溫和條件	高溫
相同點		①需提供DNA模板 ②四種脫氧核苷酸為原料 ③子鏈延伸的方向都是從5'端到3'端

解答 解：（1）PCR方法擴增目的基因的過程中，需要進行高溫解鏈過程，因此使用的DNA聚合酶要具有耐高溫的特性．
（2）多種限制酶切割，形成不同的切割位點，所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列就沒有專一性要求．
（3）植物基因工程中，將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，因此圖1步驟⑥轉(zhuǎn)基因常用農(nóng)桿菌做受體細(xì)胞．
（4）據(jù)圖分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段產(chǎn)生了X、Y兩個片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割質(zhì)粒產(chǎn)生了 M、N兩個片段，且M、N片段間存在Pst I酶切點．因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割這兩片段形成的重組質(zhì)粒，由于保留了Pstl的切割位點，所以可以得到兩種DNA分子，而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重組質(zhì)粒中，如圖I-②過程只能產(chǎn)生一種DNA片段．
故答案為：
（1）耐高溫
（2）否
（3）農(nóng)桿菌
（4）2      1

點評 本題具有一定的難度，考查了運用PCR方法擴增目的基因的有關(guān)知識，意在考查考生的圖解識別能力，尤其是限制酶的作用是解答本題的難點和關(guān)鍵點；能夠識記PCR技術(shù)中DNA聚合酶耐高溫的特點；識記DNA分子中C-G堿基對穩(wěn)定強．