Question

4．為獲取可降解高鹽度工業(yè)廢水中有機(jī)物的耐鹽菌，研究人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：
①制備含3%NaCl的固體培養(yǎng)基，以及含3%、5%和7%NaCl以高鹽度工業(yè)廢水中有機(jī)物為碳源的液體培養(yǎng)基；
②將高鹽度廢水采用平板劃線法接種于含3%Nacl的固體培養(yǎng)基，如圖一．然后置于適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察形成的菌落特征；
③將分離純化后的菌株接種到試管固體斜面培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，將該試管短期保藏待用；
④取固體斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分別加入到步驟①中制備的3組液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)35小時(shí)，定時(shí)取樣統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目．測(cè)定結(jié)果如圖二所示．

回答下列問(wèn)題：
（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，滅菌、添加NaCl溶液和調(diào)節(jié)pH的先后順序是添加NaCI溶液、調(diào)節(jié)pH、滅菌．
（2）步驟②平板劃線操作過(guò)程中，第一次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是防止雜菌污染，第二次及之后的幾次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端）．完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)6次．
（3）步驟④中統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目用稀釋涂布平板法，該方法統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)小于（填“大于”、“等于”或“小于”）實(shí)際數(shù)值．直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計(jì)數(shù)的做法是錯(cuò)誤的，正確的操作是將培養(yǎng)液搖勻后取樣計(jì)數(shù)．若每種濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，每次統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)需要從9個(gè)培養(yǎng)瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌最適合處理含3% （濃度）NaCl的廢水．

Answer 1

分析 1、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．

解答 解：（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，需待各種營(yíng)養(yǎng)成分配制完成后再調(diào)節(jié)pH，最后進(jìn)行滅菌．
（2）平板劃線操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；劃線操作結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者．由于圖1中有5次劃線，每次劃線完需灼燒，再加上第一步灼燒，故完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)6次．
（3）據(jù)實(shí)驗(yàn)操作可知，步驟④中常采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，由于培養(yǎng)過(guò)程中兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞可能生長(zhǎng)在一起形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低．取樣時(shí)不能直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計(jì)數(shù)，需將培養(yǎng)液搖勻后取樣計(jì)數(shù)．由于每種濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，共有3種不同濃度，故每次統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，需要從9個(gè)培養(yǎng)瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌 在3% NaCl最多，故最適合處理含 3% NaCl的廢水．
故答案為：
（1）添加NaCI溶液、調(diào)節(jié)pH、滅菌
（2）殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端）    6
（3）稀釋涂布平板法     將培養(yǎng)液搖勻后取樣計(jì)數(shù)    9
（4）3%  適當(dāng)延長(zhǎng)處理時(shí)間（增大接種量）

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離與培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的配制等知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)原理、步驟、操作技能的掌握情況．