Question

【題目】農(nóng)作物收獲后，燃燒秸稈會(huì)造成大氣污染，如何回收利用是我國(guó)面臨的一個(gè)重要問(wèn)題。某同學(xué)設(shè)計(jì)從土壤中分離纖維素分解菌→分解秸稈，獲得糖液→發(fā)酵生產(chǎn)乙醇，從而實(shí)現(xiàn)再次利用，請(qǐng)回答以下問(wèn)題：

（1）將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以___________為唯一碳源，并在加入___________染料的培養(yǎng)基上篩選周圍有___________的菌落。

（2）純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即___________和___________。

（3）某同學(xué)使用劃線法分離純化菌株，經(jīng)一段時(shí)間培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)有的線上長(zhǎng)滿了菌，有的線上無(wú)菌落，造成這種情況的原因可能是劃線操作時(shí)___________。

（4）發(fā)酵階段需要的菌種是___________，在產(chǎn)生乙醇時(shí)要控制的必要條件是___________。

Answer 1

【答案】纖維素 剛果紅 透明圈 平板劃線法 稀釋涂布平板法 接種環(huán)灼燒后未冷卻 酵母菌 無(wú)氧（密閉或密封）

【解析】

1、剛果紅染色法特指纖維素的染色法，剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，對(duì)纖維二糖和葡萄糖無(wú)作用；在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無(wú)法生形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，可用此來(lái)鑒別纖維素或纖維素分解菌的分解作用。

2、分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程是：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。

3、纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少含有三種組分，即C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。

4、酵母菌在酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18-25℃，需要進(jìn)行無(wú)氧發(fā)酵。

（1）篩選纖維素分解菌時(shí)需要使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，鑒定纖維素分解菌時(shí)可以進(jìn)入剛果紅染液，在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無(wú)法生形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。

（2）微生物純化時(shí)常用的接種方法是平板劃線法或稀釋涂布平板法。

（3）平板劃線法接種培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)有的線上長(zhǎng)滿了菌，有的線上無(wú)菌落，可能的原因是接種環(huán)灼燒后未冷卻燙死了菌種。

（4）糖液→發(fā)酵生產(chǎn)乙醇階段需要的菌種是酵母菌，產(chǎn)生乙醇時(shí)要控制發(fā)酵溫度在18-25℃，處于無(wú)氧條件。