Question

4．某生物興趣小組試圖探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌（目的菌）．培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示．請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
瓊脂	15g
溶解后自來(lái)水定容到1 000mL

（1）培養(yǎng)基的制備步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板．培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選目的菌．
（2）實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，原因是為目的菌提供氧氣．轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用涂布平板法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選．
（3）在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中：①培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿；②玻璃棒、試管、錐形瓶、吸管；③瘤胃中液體．其中需要滅菌的是①②（填序號(hào)）．
（4）以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)“目的菌”后，加入酚紅指示劑后變紅，說(shuō)明“目的菌”能分解尿素，理由是細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨和CO₂，pH升高，使酚紅指示劑變紅．
（5）為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果見表，其中10⁶和10⁵倍的稀釋比較合適．

稀釋倍數(shù)	103	104	105	106	107
菌落數(shù)	＞500	367	248	36	18

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)．
3、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對(duì)象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

解答 解：（1）培養(yǎng)基的制備步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板．該實(shí)驗(yàn)的目的是篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌．
（2）由于分解尿素的菌是需氧微生物，因此震蕩培養(yǎng)的目的是為目的菌提供氧氣．轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用稀釋涂布平板法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選．
（3）為了保證培養(yǎng)物不被污染，對(duì)培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿和玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管要進(jìn)行滅菌，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手要進(jìn)行消毒．
（4）尿素被分解尿素的菌氧化成氨氣，氨氣會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，指示劑酚紅變紅，因此以通過(guò)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，檢測(cè)培養(yǎng)基pH的變化來(lái)判斷尿素是否被分解．
（5）觀察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)應(yīng)選30-300之間的培養(yǎng)皿進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，故應(yīng)選10⁶或10⁵倍的稀釋比較合適．
故答案為：
（1）滅菌 　  篩選目的菌
（2）為目的菌提供氧氣　  涂布平板
（3）①②
（4）脲    氨        
（5）10⁶和10⁵

點(diǎn)評(píng) 本題是對(duì)用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方及營(yíng)養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、常用的接種方法、無(wú)菌操作技術(shù)、對(duì)分解尿素的菌的鑒定等相關(guān)知識(shí)的綜合性考查，回憶微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方和營(yíng)養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作、常用的接種方法的具體操作和目的，無(wú)菌操作技術(shù)、對(duì)分解尿素的菌的鑒然后結(jié)合問(wèn)題進(jìn)行解答．