Question

【題目】【生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題】

人外周血單核細(xì)胞能合成白介素2(IL～2)。該蛋白可增強機體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解。研究人員將IL－2基因與人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一個融合基因，并在酵母菌中表達(dá)，獲得具有IL－2生理功能、且不易降解的IL－2－HSA融合蛋白。其技術(shù)流程如圖。請回答下列問題。

(1)培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞需要無菌、無毒的環(huán)境，為防止培養(yǎng)過程中的污染，通常要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的_____；為保證營養(yǎng)充足，通常要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加_____；除提供適宜培養(yǎng)溫度和pH外，還需適宜氣體環(huán)境，通常將培養(yǎng)皿置于含_____的混合氣體培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

(2) 圖中②表示________過程，圖中③表示________過程。

(3) 表達(dá)載體1中的位點________，應(yīng)為限制酶BglⅡ的識別位點，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2。表達(dá)載體2導(dǎo)入酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL－2蛋白對應(yīng)的堿基序列不能含有________(起始、終止)密碼子，才能成功表達(dá)出IL－2－HSA融合蛋白。

(4)應(yīng)用____________雜交技術(shù)可檢測酵母菌是否表達(dá)出IL－2－HSA融合蛋白。IL－2－HSA融合蛋白從酵母菌細(xì)胞中排出，需要酵母菌細(xì)胞中_________（細(xì)胞器）的加工。

Answer 1

【答案】(1)抗生素（1分） 血清或血漿（1分） 95%空氣加5%CO2（1分） (2) 反(或逆)轉(zhuǎn)錄（2分） 構(gòu)建表達(dá)載體（2分） (3) a （2分） 終止（2分） (4)抗原—抗體（2分） 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體（2分）

【解析】（1）培養(yǎng)基添加抗生素可以防止污染；動物細(xì)胞培養(yǎng)時通常加入血清或血漿； 95%空氣加5%CO2是細(xì)胞培養(yǎng)的氣體環(huán)境，空氣提供細(xì)胞呼吸的氧氣，二氧化碳維持培養(yǎng)液的PH；

（2）②表示由mRNA到cDNA的過程，屬于逆轉(zhuǎn)錄；③過程表示目的基因與運載體結(jié)合，屬于構(gòu)建基因表達(dá)載體；

（3）切割目的基因的限制酶應(yīng)和切割運載體相同，切割目的基因右側(cè)的限制酶為BglⅡ，故a為BglⅡ的識別位點；起始密碼子代表氨基酸，終止密碼不代表氨基酸，故蛋白中沒有終止密碼子對應(yīng)序列；

（4）檢測蛋白質(zhì)是否表達(dá)成功應(yīng)用抗原—抗體雜交技術(shù)；L－2－HSA融合蛋白屬于分泌蛋白，參與分泌蛋白的加工的細(xì)胞器是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體。