Question

【題目】為了分離和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行了如圖A 所示的實驗。

（1）步驟③的培養(yǎng)基成分與普通液體培養(yǎng)基相比，最大的區(qū)別是步驟③培養(yǎng)基中____________。從功能上講，步驟③中使用的培養(yǎng)基屬于____________培養(yǎng)基。

（2）同學甲進行步驟④的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖B所示。該同學的接種方法是_________，出現(xiàn)圖B結果可能的失誤操作是____________。純化菌株時，還可釆用平板劃線法。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有____________。

（3）同學乙也按照同學甲的接種方法進行了步驟④的操作：將lmL樣品稀釋100倍，在3 個平板上分別接入0．lmL稀釋液；培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為____________個。

（4）步驟⑤需要振蕩培養(yǎng)，原因是____________。

（5）步驟⑤后取樣測定石油含量的目的是____________。

Answer 1

【答案】石油是唯一碳源 選擇培養(yǎng)基 稀釋涂布平板法 涂布不均勻 接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始 5.7×107 提高培養(yǎng)液中（溶解）氧的含量 篩選出分解石油能力最強的細菌

【解析】

1.微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

2.分析圖B：圖B采用的是稀釋涂布平板法，但涂布不均勻。

（1）對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿要進行滅菌處理，對操作者的雙手需要進行清洗和用酒精消毒；步驟③與步驟②中培養(yǎng)基成分相比，最大的區(qū)別是石油是唯一碳源，用以篩選高效分解石油的細菌。從功能上講屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）同學甲進行步驟④的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖B所示，菌落密集處呈片狀分布，說明該同學的接種方法是稀釋涂布平板法，涂布平板時只能取少量菌懸液滴加到培養(yǎng)基表面，菌懸液量過多會導致菌體堆積，影響分離效果。出現(xiàn)圖B結果可能的操作失誤是涂布不均勻。劃線接種時，在第一區(qū)域劃線后須將該工具灼燒滅菌后再劃線，在第二次劃線時須從第一次劃線的末端開始，這樣做的目的是將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基上。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落，造成劃線無菌落可能的操作失誤有①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開始。

（3）同學乙也按照同學甲的接種方法進行了步驟④的操作：將1mL樣品稀釋100倍，在3個平板上分別接人0.1mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為（56+58+57）÷3÷0.1×1000×100=5.7×107個．

（4）步驟⑤需要振蕩培養(yǎng)，原因是提高培養(yǎng)液中（溶解）氧的含量，通過振蕩可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質的利用率。

（5）步驟⑤后取樣測定石油含量的目的是篩選出分解石油能力最強的細菌。