Question

20．RT-PCR是將mRNA逆轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)相結(jié)合的技術(shù)，具體過(guò)程如圖所示，請(qǐng)回答：

（1）過(guò)程①需要加入緩沖液、原料、RNA提取物、逆轉(zhuǎn)錄酶 和引物A等．
（2）過(guò)程②首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開(kāi)（答對(duì)一點(diǎn)即得分），該反應(yīng)體系中所用的TaqDNA聚合酶至少應(yīng)能耐受95℃℃高溫．
（3）決定RT-PCR擴(kuò)增片段的是引物，要對(duì)圖中單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上至少需要2ⁿ-1個(gè)引物B．
（4）利用RT-PCR技術(shù)可用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè)，并可提高檢測(cè)的靈敏度，原因是增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)．
（5）RT-PCR過(guò)程中主要通過(guò)對(duì)溫度的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)高效有序地進(jìn)行．

Answer 1

分析 1、分析圖示，過(guò)程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的過(guò)程，表示逆轉(zhuǎn)錄．過(guò)程Ⅱ先使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開(kāi)，再以單鏈的DNA合成雙鏈的DNA，最后利用RCR技術(shù)進(jìn)行DNA復(fù)制．
2、PCR技術(shù)的原理是模擬生物體內(nèi)DNA分子復(fù)制的過(guò)程，利用DNA分子熱變形原理，通過(guò)控制溫度控制控制DNA分子的解聚和結(jié)合，DNA分子體內(nèi)復(fù)制過(guò)程DNA的解旋是在解旋酶的作用下實(shí)現(xiàn)的；PCR擴(kuò)增DNA片段過(guò)程最高經(jīng)過(guò)n次擴(kuò)增，形成的DNA分子數(shù)是2ⁿ個(gè)，其中只有2條單鏈不含有引物．

解答 解：（1）過(guò)程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的過(guò)程，表示逆轉(zhuǎn)錄，需要加入緩沖液、原料、RNA提取物、逆轉(zhuǎn)錄酶和引物A等．
（2）過(guò)程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開(kāi)，該反應(yīng)體系中所用的Taq酶至少應(yīng)能耐受95℃高溫．
（3）決定RT-PCR擴(kuò)增片段的是引物；過(guò)程Ⅱ擬對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，根據(jù)DNA分子半保留復(fù)制特點(diǎn)可知，該過(guò)程理論上至少需要2ⁿ-1個(gè)引物B．
（4）利用RT-PCR技術(shù)對(duì)某些微量RNA病毒進(jìn)行檢測(cè)時(shí)可提高檢測(cè)的靈敏度，原因是增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)．
（5）RT-PCR過(guò)程中主要借助對(duì)溫度的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行．
故答案為：
（1）RNA提取物     逆轉(zhuǎn)錄酶
（2）讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開(kāi)（答對(duì)一點(diǎn)即得分）   95℃
（3）引物      2ⁿ-1
（4）增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)
（5）溫度

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程和PCR技術(shù)及其應(yīng)用過(guò)程，對(duì)于RNA的逆轉(zhuǎn)錄、DNA分子復(fù)制、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片的理解把握知識(shí)點(diǎn)間的內(nèi)在聯(lián)系及堿基互補(bǔ)配對(duì)原則的應(yīng)用是解題的關(guān)鍵．