Question

【題目】鐵皮石斛位居中華九大“仙草”之首，其富含多糖成分。研究表明鐵皮石斛多糖對(duì)細(xì)胞增殖有一定的促進(jìn)作用，OD值能反映細(xì)胞增殖水平。為研究其不同濃度、不同處理時(shí)間的促進(jìn)效果。請(qǐng)根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)材料，提出并完善實(shí)驗(yàn)思路，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行處理。

材料與用具：400 hg/mL的鐵皮石斛多糖溶液、生理鹽水、小鼠胚胎干細(xì)胞（mES）、細(xì)胞培養(yǎng)液、5%二氧化碳培養(yǎng)箱、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、移液器、0.05%胰蛋白酶等

（說(shuō)明：不考慮加入多糖對(duì)體積的影響；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的孔內(nèi)可進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，圖中大寫字母表示組別； 3天內(nèi)每隔24小時(shí)計(jì)數(shù)一次，OD值的具體測(cè)法不作要求，實(shí)驗(yàn)條件適宜）

（1）實(shí)驗(yàn)思路：(實(shí)驗(yàn)分組用表格形式表示）

①____________________________________。

②____________________________________。

③____________________________________。同時(shí)設(shè)置G組為不加mES的空白對(duì)照組。

④____________________________________。

⑤____________________________________。

（2）實(shí)驗(yàn)證明，鐵皮石斛多糖濃度在50%/mL200μg/mL時(shí)，處理24h、48h、72h均對(duì)mES的增殖有促進(jìn)效果，處理時(shí)間與效果呈正相關(guān)，且濃度為100μg/mL時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)。請(qǐng)用曲線圖在一個(gè)坐標(biāo)系中表示該實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

Answer 1

【答案】 利用濃度為400μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液和生理鹽水配制25μg/mL、50μg/mL、1OO μg/mL、200μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液 按上述分組，用移液器取等量的小鼠胚胎干細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的A—F組中培養(yǎng)，每個(gè)濃度做4個(gè)重復(fù)。同時(shí)G組設(shè)置為不加mES的空白對(duì)照組 將96孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 每24 h取對(duì)應(yīng)組細(xì)胞用0.05%胰蛋白酶處理，測(cè)定每組細(xì)胞的OD值，并記錄分析統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

【解析】本題考查實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，細(xì)胞增殖相關(guān)知識(shí)，意在考察考生對(duì)知識(shí)點(diǎn)的理解和應(yīng)用能力。

（1）本課題研究的是鐵皮石斛多糖在不同濃度、不同處理時(shí)間對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)效果，所以實(shí)驗(yàn)的自變量是不同濃度的鐵皮石斛多糖和不同的處理時(shí)間，因變量是細(xì)胞的OD值。根據(jù)所給實(shí)驗(yàn)結(jié)果鐵皮石斛多糖濃度在50%/mL200μg/mL時(shí)，處理24h、48h、72h，所以應(yīng)配制鐵皮石斛多糖濃度在50%/mL200μg/mL時(shí)，處理24h、48h、72h。

而所給的實(shí)驗(yàn)材料是400μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液，所以實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)首先利用濃度為400μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液和生理鹽水配制25μg/mL、50μg/mL、1OO μg/mL、200μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液。然后進(jìn)行分組并培養(yǎng)不同的時(shí)間即表格所述：

為按上述分組，用移液器取等量的小鼠胚胎干細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的A—F組中培養(yǎng)，每個(gè)濃度做4個(gè)重復(fù)。同時(shí)G組設(shè)置為不加mES的空白對(duì)照組。將其放在相同且適宜的條件下培養(yǎng)，即將96孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 每24 h取對(duì)應(yīng)組細(xì)胞用0.05%胰蛋白酶處理，測(cè)定每組 細(xì)胞的OD值，并記錄分析統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以濃度為橫坐標(biāo)，以OD值為縱坐標(biāo)，然后做出不同時(shí)間的圖像，要表示出處理時(shí)間與效果呈正相關(guān)，且濃度為100μg/mL時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，即