Question

【題目】黃曲酶毒素B1（AFB1）是一種較強(qiáng)的致癌物質(zhì)，危害人類健康。為了準(zhǔn)確檢測AFBI的濃度，科學(xué)家嘗試用基因工程的方法開發(fā)抗AFE1抗體，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)�；卮鹣铝袉栴}：

（1）用___________兔疫小鼠，取小鼠脾臟細(xì)胞與___________融合，得到雜交瘤細(xì)胞。

（2）提取雜交瘤細(xì)胞的總RNA，經(jīng)___________得到cDNA，再利用特異性引物經(jīng)過___________擴(kuò)增得到抗AFB1抗體基因。科學(xué)家選用雜交瘤細(xì)胞而非被免疫小鼠的脾臟細(xì)胞的原因:__________________。

（3）隨后，用限制NcoⅠ和BamHⅠ酶切以上抗AFB1抗體基因和質(zhì)粒，經(jīng)DNA連接酶處理后將重組質(zhì)粒導(dǎo)如大腸桿菌，為得到抗AFB1抗體，需對(duì)成功轉(zhuǎn)化的大腸桿菌進(jìn)行破碎處理，然后才能提純得到目標(biāo)抗體的原因是_________________________________。

Answer 1

【答案】AFB1骨髓瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄PCR雜交瘤細(xì)胞表達(dá)（或含有）抗AFB1抗體的基因，且可無限增殖方便保存大腸桿菌是原核生物，無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法分泌抗體

【解析】

單克隆抗體的制備過程：對(duì)小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。基因工程的基本步驟：目的基因的獲取、構(gòu)建基因表達(dá)載體、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。

（1）根據(jù)題意分析，該抗體是由黃曲酶毒素B1誘導(dǎo)形成的，因此應(yīng)該用黃曲酶毒素B1（AFB1）免疫小鼠，然后從小鼠的脾臟中提取B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得雜交瘤細(xì)胞。

（2）由RNA得到cDNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄；得到的cDNA可以利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增；由于雜交瘤細(xì)胞可以表達(dá)（或含有）抗AFB1抗體的基因，且可無限增殖方便保存，所以科學(xué)家選用雜交瘤細(xì)胞而非被免疫小鼠的脾臟細(xì)胞。

（3）由于大腸桿菌是原核生物，無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法分泌抗體，因此需對(duì)成功轉(zhuǎn)化的大腸桿菌進(jìn)行破碎處理，然后才能提純得到目標(biāo)抗體。